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目的 调查2001~2003年山东省青岛地区汉坦病毒的感染情况及其分子流行病学特征,研究汉坦病毒山东省青岛地区流行株HTN型和SEO型快速精确的分型检测方法,积累流行病学资料,为快速检测诊断试剂和分型检测试剂以及疫苗的研制奠定基础。 方法 采集HFRS急性期(发病1~5天)血清标本50份,以提取的RNA作为模板,根据GENE BANK中查找汉坦病毒相关序列,利用DNAstar软件设计一对属特异性引物,该引物为HTN型和SEO型的通用引物,作为外套PCR引物;同时分别设计HTN型特异性引物和SEO型特异性引物,作为内套引物;RT-Nest-PCR扩增汉坦病毒基因组M片段G1基因区部分核苷酸序列,由紫外光透射仪观察结果。PCR产物插入T-A载体克隆测序,将测序的结果用DNAstar软件分析序列,进行对排,比较离散度。 结果 在50份标本中用HTN型特异性引物扩增出8份,占16%;用SEO型特异性引物扩增出29份,占58%;总阳性率为74%。总体来看青岛地区流行的汉坦病毒毒株多为SEO和HTN型,以SEO型为主。SEO型汉坦病毒间核苷酸序列的差异相对较小,在核苷酸序列水平,其基因的离散率为0.3~8.9%。HTN型汉坦病毒的变异率较高,其基因的离散率为1.8~13.1%。 结论 青岛地区是以SEO型为主,HTN型并存的汉坦病毒流行的混合疫区,其中HTN型主要发现在胶南市。SEO型汉坦病毒相对较保守,病毒间核苷酸序列的差异相对较小,而HTN型汉坦病毒的变异率则较高。