双氯芬酸为新型的非甾体消炎药，是公认的非激素类非细菌性的消炎药，目前国内外临床上应用最多的是双氯芬酸的钠盐，但双氯芬酸钠对眼、胃黏膜等有一定的刺激性，用后使眼部产生灼烧疼痛感，不易为患者所接受。为减少其副作用，国外在其结构改进方面进行了研究如：将双氯芬酸制成了一些无机盐及有机盐类，但由于无机盐水溶性很小，不适宜作成液体形式的药物，而有机盐类有致癌成分，所以均不理想。在前人工作的基础上为了克服上述的不足，以期开发一种稳定性强、水溶性大、并能制成不同剂型的药物，因此我们对双氯芬酸钠的结构进行修饰，合成了双氯芬酸胆碱(diclofenac acidcholine，DAC，分子式为C₁₉H₂₄O₃N₂C₁₂，相对分子量399)，结构简式为：郑州大学2004年硕士研究生毕业论文双氯酚酸胆碱分析方法研究 并对其抗炎作用进行了动物实验。实验显示:双氯芬酸胆碱滴眼剂抑制炎症反应的有效剂量小，抗炎作用明显且无刺激性。在此基础上，本文对双氯芬酸胆碱的分析方法进行了研究。一、醋酸铜比色法测定双氯芬酸胆碱的含量 目的建立可见分光光度法测定双氯芬酸胆碱的方法。方法双氯芬酸胆碱在pHS.O一7.2的溶液中与醋酸铜形成稳定的络合物，在氯仿中显绿色，经氯仿萃取后，用可见分光光度法测定双氯芬酸胆碱的含量。结果双氯芬酸胆碱一铜（II）络合物，在680士Inm有最大吸收，其标准曲线线性良好，回归系数r=0 .9994，摩尔吸光系数为1.62x105，平均回收率为100.Zlryo，相对标准偏差为0.286%。结论该方法测定双氯芬酸胆碱的含量，准确度高，快速简便易行。二.邻菲咯琳铁（班）比色法.测定双氯芬酸胆碱的含量 目的:探讨比色法测定双氯芬酸胆碱的可行性。方法:以邻菲咯琳铁（111）为显色剂，在加热条件下，使铁（111）还原为铁（11），铁（I工）与1:10邻菲咯琳络合呈色，用可见分光光度法测定双氯芬酸胆碱的含量。结果:双氯芬酸胆碱在100℃加热25min能定量地将显色剂邻菲咯琳一铁（Ilx）中的F e3十还原成F eZ+，其最大吸收波长为5 10士1 nm，在0 .25-25.00mg/L范围内线性良好，摩尔吸光系数为1.3。火1。’，标准曲线的回归系数r二0.9996，平均回收率为99.80%，相对标准偏差为0.723%。结论:以邻菲咯琳一铁（m）为显色剂测定双氯芬酸胆碱的含量，线性范围好，准确度高，方法简便。三、紫外分光光度法测定双氯酚酸胆碱含量 目的:用紫外分光光度法测定双氯酚酸胆碱含量。方法:以无水乙醇为溶剂，在284nm处测定双氯酚酸胆碱含量。结果:在30一50协g/ml浓度范围内成线性关系，r=1.0013，平均回收率为100.3%， 郑州大学2004年硕士研究生毕业论文双氯酚酸胆碱分析方法研究 RSD=1 .34%。结论:含量测定方法简便、快速、结果准确适用于药物定 量分析。 四.高效液相色谱法测定双氯酚酸胆碱的含量 目的:建立双氯酚酸胆碱的的高效液相色谱含量测定法。方法:以安捷伦c，8为色谱柱，甲醇一乙睛一o.02mol/L磷酸盐溶液（25::25:50）为流动相，检测波长276nm，进样量ZOul。结果:线性范围10一Zooug/ml，r二0.9999，回归方程A=30.7424815 xAmt+1.2990519。3种浓度的平均回收率为101.3，日内和日间RSD均小于5%。结论:该方法准确灵敏，精密度好，可作为双氯酚酸胆碱标准的测定方法。 结论 1.本研究建立的醋酸铜和邻菲咯琳铁可见分光光度法，测定双氯芬酸胆碱的含量，方法简便，准确度高，干扰少，所用仪器价廉，适用于在mg级水平含量的样品分析，便于基层单位推广。2.本研究建立的紫外分光光度法，测定双氯芬酸胆碱，用乙醇和水作溶剂，方法简便、快速、结果准确、精密度较高，适用在pg级水平生物样品含量的分析。 在实际样品测定中，用水作溶剂进行测定，避免了有机溶剂的毒性和 对环境的污染，经济实惠。3.本研究以甲醇一乙睛一磷酸盐（25:25:50）为流动相，建立了高效液相色谱法的测定方法。分离效果好，精密度、回收率高，灵敏度高，适用于丝级水平生物样品（如房水等）中微量成分的分析，可作为标准的测定方法。 本研究对双氯芬酸胆碱的分析方法进行了详尽的研究，建立的四种分析方法，各有其适用范围，测定含量从毫克级到纳克级，为不同层次、 郑州大学2004年硕士研究生毕业论文双氯酚酸胆碱分析方法研究不同含量、不同要求样品的测定，提供理想的分析方法，为双氯酚酸胆碱的进一步开发及临床应用提供了极好的检测手段及标准。