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根结线虫(Meloidogyne spp.)是危害农作物的重要病原线虫之一,与真菌、细菌等病原物一样,根结线虫也会分泌效应分子到寄主植物中,诱发寄主的效应分子触发免疫反应(effector-triggeredimmunity,ETI),但是迄今在根结线虫中鉴定的无毒基因(效应分子)还较少,只发现了对应番茄抗性基因Mi的2个无毒性相关基因,即南方根结线虫(M.incognita)的map-1基因和爪哇根结线虫(M.javanica)的Cg-1基因。本文采用dsRNA浸泡处理的离体RNAi和TRV介导的活体RNAi技术,研究南方根结线虫map-1和Cg-1基因的沉默对南方根结线虫毒性和寄生的影响。主要结果如下:1.经map-1 dsRNA和Cg-1 dsRNA浸泡的南方根结线虫无毒群体2龄幼虫能够在Mi抗性番茄上寄生并完成生活史将南方根结线虫无毒群体2龄幼虫分别浸泡在map-1 dsRNA和Cg-1 dsRNA溶液中,浸泡6 h后RT-qRCR检测靶基因的转录水平。结果显示,与gfp dsRNA浸泡处理相比,map-1和Cg-1的转录水平在靶基因dsRNA浸泡处理后的2龄幼虫体内均显著降低;接种Mi-1基因抗性番茄的表型检测结果显示,经gfp dsRNA浸泡处理后的2龄幼虫在抗性番茄上产生了极少量根结,但没有产生卵块;而经map-1 dsRNA和Cg-1 dsRNA浸泡处理后的2龄幼虫均能侵染抗性番茄,且能正常发育为雌虫,最终在根系上产生根结和卵块。结果表明,靶基因dsRNA浸泡处理能够对南方根结线虫无毒/毒性产生一定程度的影响,导致其在含有Mi-1基因的抗性番茄上能成功完成寄生生活,揭示了 map-1和Cg-1基因在南方根结线虫与抗性番茄的非亲和互作中可能具有作用。2.转染TRV::map-1和TRV::Cg-1能够提高南方根结线虫无毒群体在Mi抗性番茄上的繁殖力利用TRV介导的RNAi体系,以map-1和Cg-1为靶标,在活体条件下研究了这两个基因的沉默对南方根结线虫无毒/毒性的影响。RT-RCR检测TRV病毒cp基因证实,在转染番茄7 d后病毒能到达根部,14 d后在根部仍能检测到病毒的复制;接种实验显示,无毒群体2龄幼虫接种TRV::gfp抗性番茄株系后,在根系上产生了极少量的根结,但没有产生卵块;而在TRV::map-1和TRV::Cg-1抗性番茄株系上均产生了少量的根结、雌虫以及卵块,但远少于毒性群体在抗性番茄上产生的数量。结果表明,南方根结线虫map-1和Cg-1基因的沉默能够提高南方根结线虫无毒群体在抗性番茄上的繁殖力,验证了这两个基因与根结线虫的无毒/毒性存在相关性。综上所述,离体和活体RNAi均证实南方根结线虫map-1和Cg-1基因与根结线虫的无毒/毒性具有相关性,但沉默二者之一均不能彻底改变线虫的无毒/毒性,揭示线虫的毒性变异可能为数量性状而非质量性状。