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大豆是一种重要的油料作物,是植物蛋白及油脂的重要来源,又是工业原料和牲畜家禽的重要饲料,在我国广泛种植。通过基因工程的方法对大豆进行有目的改良,是一种较常规育种更为有效、快速的方法。但大豆较其它作物在遗传转化操作技术的某些方面的难度大一些,建立理想的、高效的大豆转化体系,仍是国内外学者们的研究热点之一。 本研究以5个大豆品种为材料,研究了种子萌发天数、外植体大小、萌发培养基、诱导培养基、激素浓度对大豆子叶节再生的影响,以求建立一个大豆子叶节高效再生体系用于大豆的遗传转化。结果表明,大豆种子萌发天数对丛生芽分化有影响,以萌发5-7天为宜;子叶节外植体大小以保留全部子叶为宜;不同基因型品种对萌发培养基、诱导培养基要求不同,台湾292的最佳萌发培养基为1/2MS+1mg/L6-BA,而鄂8157、湘春豆18号、湘春豆13号、湘春豆15号的最佳萌发培养基为1/2MS+2mg/L6-BA,台湾292、鄂8157、湘春豆15号的最佳诱导培养基为MS+2mg/L6-BA,湘春豆18号的最佳诱导培养基为MS+1mg/L6-BA、湘春豆13号的最佳诱导培养基为1/2MS+2mg/L6-BA+0.05mg/LIBA;大豆子叶节丛生芽生根时IBA浓度以2mg/L为宜。 COI1基因是茉莉素信号传导途径中的重要调控基因,调控植物育性和抗性。GmCOI1基因是从大豆中分离克隆的COI1同源基因,将GmCOI1基因的全长序列插入到植物表达载体pROK2中,构建了GmCOI1表达载体,通过农杆菌介导法转化大豆。同时,对农杆菌介导大豆子叶节遗传转化条件进行了研究,结果表明,遗传转化的最佳条件为:预培养1d,共培养3d,农杆菌侵染时间为30min。对抗Kan植株进行PCR检测,初步证实GmCOI1基因整合到大豆的基因组中。