【摘 要】
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目的 本研究通过构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)启动子/增强子靶向性调控的尿嘧啶磷酸核糖转移酶(UPRT)基因真核表达重组质粒(pPSMA promoter/enhancer-UPRT),探索pPSMApromot
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目的 本研究通过构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)启动子/增强子靶向性调控的尿嘧啶磷酸核糖转移酶(UPRT)基因真核表达重组质粒(pPSMA promoter/enhancer-UPRT),探索pPSMApromoter/enhancer-UPRT/5-FU自杀基因系统对前列腺癌特异的靶向杀伤作用。 方法 ① 首先采用PCR技术,从前列腺癌细胞株LNCaP的总DNA中扩增PSMA启动子和增强子基因序列,分子克隆技术将PSMA启动子增强子基因序列定向插入报告基因表达质粒载体(pEGFP-1),构建重组质粒pPSMApromoter/enhancer-EGFP。应用PCR技术从大肠杆菌JM109基因组中扩增UPRT基因序列,同样通过分子克隆技术将pPSMApromoter/enh-ancer-EGFP酶切去除EGFP,连接上UPRT基因,构建PSMA启动子增强子靶向性调控的UPRT基因真核表达质粒pPSMApromoter/enhancer-UPRT。② 免疫组化技术检测PSMA在前列腺癌细胞株和非前列腺癌细胞株等不同细胞株的表达。脂质体介导转染重组质粒pPSMApromoter/enhancer-EGFP进入前列腺癌细胞株和非前列腺癌细胞株等,通过荧光表达来观察PSMA promoter/enhancer在细胞中靶向调控作用。转染重组质粒pPSMApromoter/enhancer-UPRT和pPSMA promoter/enhancer-EGFP的LNCaP细胞株,加入G418,筛选出稳定表达UPRT基因和EGFP的细胞株。③MTT
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