在家禽中,卵巢作为母鸡最重要的生殖器官之一,与鸡的产蛋性能密切相关,因而其生物学功能备受关注。卵巢的发育不仅受到环境和营养等因素的影响,而且受到下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的调控。HPG轴在蛋鸡卵巢发育过程中发挥至关重要的作用,调节机体的生长发育。本实验室前期对性成熟前、后鸡的下丘脑和卵巢组织分别进行了高通量测序,结果表明,性成熟后miR-1b-3p表达量在两个组织中均显著上升,推测miR-1b-3p可能参与了鸡的性成熟及卵巢发育调控。本实验主要研究了miR-1b-3p在鸡卵泡中的表达及其对卵泡膜细胞的作用,鉴定了启动子区的多态性并与产蛋性状进行关联分析。主要结果如下:(1)通过荧光定量PCR检测30个miRNA在60日龄、100日龄、140日龄未开产(140a)和140日龄开产(140b)的济宁百日鸡下丘脑中的表达量,结果发现miR-1b-3p在开产前各时期表达无显著变化,开产后显著升高;在性成熟母鸡的卵泡中,miR-1b-3p主要在等级卵泡膜细胞中高表达。(2)对等级卵泡膜细胞进行瞬时转染miR-1b-3p mimics,转染48h后qPCR检测基因表达量,结果表明,miR-1b-3p能够显著上调MAPK1(P<0.05)与IGF1(P<0.05)的表达。(3)CCK-8检测结果表明,miR-1b-3p能促进鸡等级卵泡膜细胞增殖(P<0.05)。(4)进一步鉴定miR-1b-3p启动子区的多态位点,发现了一个有效的单核苷酸多态性SNP:rs737028527(G>A)位点。构建不同基因型的荧光报告基因载体和真核表达载体,通过双荧光素酶报告基因和qPCR检测,发现G等位基因的启动子可以显著促进miR-1b-3p的启动活性及成熟体的表达量。基因型与隐性白洛克鸡产蛋性能关联分析结果显示,AA基因型对应较早的开产日龄和较多的32周、48周产蛋数。通过PROMO在线预测,发现转录因子Sp1只结合于miR-1b-3p的G等位基因,双荧光素酶报告基因检测结果表明,转录因子Sp1可以促进miR-1b-3p的G等位基因启动子活性(P<0.05)。综上所述,通过对miR-1b-3p在鸡卵泡细胞中的表达和功能分析,初步明确其在鸡卵泡发育中可能发挥重要调控作用。对miR-1b-3p启动子区分析,发现了一个与鸡产蛋性状显著关联的SNP位点,该位点受转录因子Sp1的调控并影响miR-1b-3p的表达。