黑果腺肋花楸多酚提取纯化工艺及其抗氧化活性与稳定性研究

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黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa),果实中含有大量多酚类物质,在目前已知植物果实中含量最高。但由于其果实味道苦涩、不易贮藏、产地限制等特点,使得对其多酚提取纯化工艺的研究尤为重要。本研究选择采自辽宁海城的黑果腺肋花楸冻果为原材料,分别对其多酚的提取、纯化工艺进行优化。同时,通过对DPPH、ABTS及超氧阴离子自由基清除率的测定,评价纯化后的黑果腺肋花楸多酚类物质的抗氧化活性,并在此基础上利用细胞抗氧化分析法比较黑果腺肋花楸、蓝莓、树莓和蓝靛果多酚的抗氧化活性。以及对纯化后的黑果腺肋花楸多酚的稳定性进行测定。主要研究结果如下:1.确定了黑果腺肋花楸多酚的最佳提取工艺,并测定其抗氧化活性。以超声波辅助提取,对乙醇浓度、液料比、提取温度、提取时间进行单因素实验,在此基础上以提取量为指标,利用响应面法优化工艺条件;通过对DPPH、ABTS及超氧阴离子自由基清除率的测定,评价其多酚类物质的抗氧化活性。结果表明:黑果腺肋花楸多酚最佳提取条件为液料比44:1mL:g、乙醇浓度55%、提取温度45℃、提取时间90min,在此条件下黑果腺肋花楸多酚提取量达19.549 mg/g。黑果腺肋花楸多酚对DPPH、ABTS及超氧阴离子自由基有较强清除作用,并与其质量浓度呈正相关关系,说明其多酚具有良好的抗氧化活性。2.采用大孔树脂纯化黑果腺肋花楸中多酚类物质。通过对比6种大孔树脂对黑果腺肋花楸多酚吸附-解析效果,筛选出XAD-7大孔树脂作为最佳纯化材料,并通过单因素试验确定XAD-7大孔树脂纯化黑果腺肋花楸多酚的静态吸附-解吸最佳工艺条件为:吸附时间4h、解吸时间2h、上样浓度3.61mg/mL、样液pH值4、乙醇溶液体积分数95%、乙醇pH值7;其对黑果腺肋花楸多酚动态吸附-解吸最佳工艺条件为:上样流速2mL/min、上样量560mL、洗脱流速2mL/min、洗脱体积300mL、水洗用量350mL。在此条件下,黑果腺肋花楸多酚纯度由11.62%提高到64.37%,表明XAD-7大孔树脂对于黑果腺肋花楸多酚具有较好的纯化效果。3.为进一步探究大孔树脂纯化后的黑果腺肋花楸多酚产品的抗氧化活性,通过对ABTS、FRAP自由基清除率的测定,评价其抗氧化能力强弱。并在此基础上,利用人类肝癌细胞HepG2,评价黑果腺肋花楸、蓝莓以及蓝靛果多酚的抗氧化活性。结果表明,纯化后的黑果腺肋花楸多酚具有极强的抗氧化活性,能够有效清除ABTS和FRAP自由基。在细胞抗氧化试验中,黑果腺肋花楸多酚的CAA值略低于蓝莓多酚,高于蓝靛果多酚。表明黑果腺肋花秋多酚与其他浆果多酚相比具有较强的抗氧化能力。考略到其果实中的多酚含量,黑果腺肋花楸多酚是一种很有价值的天然抗氧化剂产品。4.通过测定黑果腺肋花楸多酚在不同条件下多酚保留率的变化,分别研究了在不同pH值、糖类、温度、光照强度、氧化还原剂和防腐剂条件下对黑果腺肋花楸多酚稳定性影响。结果表明:在pH 2~3的条件下多酚保留率可达96.12%以上;糖类对多酚稳定性具有一定增强作用,多酚保留率与糖分添加量呈正相关;随着光照强度的增加,多酚保留率显著下降,在避光条件下多酚最为稳定;当温度超过50℃时,温度对多酚保留率影响显著;氧化还原剂对多酚具有显著的破坏作用,而氧化剂对多酚的影响明显大于还原剂;防腐剂可有效减少多酚的降解,但随防腐剂添加量的增加,多酚保留率并无显著增高,低添加量的防腐剂可有效提高多酚稳定性。
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