鱼腥藻PCC7120铁调蛋白基因all1691的初步研究

来源 :中南民族大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kebo824
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
蓝藻(Cyanophyceae)或蓝细菌分布广泛,种类繁多,形态多样,电镜下可见光合色素汇集的类囊体,因此蓝藻是一种光合自养型原核微生物,在食用、资源开发、环境净化等方面都有较高的应用价值。鱼腥藻PCC7120异形胞的发育调控及固氮机制的研究基本完善,本文研究对象铁摄取调节蛋白FurA受控于异形胞发育调控因子NtcA,各部件紧密联系于精细网络中保证藻细胞正常的活性。本研究第一部分是在前期研究基础上,选取鱼腥藻Anabaena sp. PCC7120为实验材料,以藻内铁摄取调节基因fur(ferric uptake regulator)作为研究对象,旨在对鱼腥藻PCC7120中铁摄取调节基因furA(all1691)及其相关基因进行克隆和表达,并探究环境中Fe3+浓度对藻生长情况的影响。首先对传统的酚氯仿法进行改进,提取鱼腥藻PCC7120染色体总DNA,由Cynobase提供的序列信息设计特异性引物,以鱼腥藻PCC7120总DNA为模板进行Touch-down PCR,扩增furA、furB、furC这3个fur同源基因片段,运用TA克隆获得稳定保存的pMD-fur菌液,经质粒提取及双酶切,将目的片段与表达载体pET-28a进行连接,转入表达宿主菌E.coli BL21中构建furA重组表达质粒载体pET-1691,在1mmol/L的IPTG诱导下,于37℃下摇床培养15h,经SDS-PAGE检测到含表达载体系统自带标签(T7和组氨酸标签)的约19KD的蛋白条带,为了得到实验条件下蛋白表达的最优表达量,前期已对诱导温度、诱导剂浓度等影响因素进行探究实验,发现在37℃、0.8mmol/L IPTG诱导表达量最佳。本实验对诱导时间进行了探究,发现12h是诱导时间设置中的最佳诱导时间。为了预测蛋白结构与功能,辅助生物信息学的方法,利用在线软件对FurA进行分析发现,它属于定位于细胞质基质,与细胞壁结合的蛋白,构建的三维图显示边缘具有约5个螺旋结构域,包裹中间区域的β折叠结构区。进一步对蛋白进行纯化,用于后续研究。本研究第二大部分设计不同Fe3+浓度,系统化的研究藻细胞在生长过程中藻细胞密度、蛋白含量、叶绿素含量和总糖含量这些生长指标的变化,以探究对鱼腥藻PCC7120的生长影响。结合分光光度法、标准曲线法和分子生物方法,从生长曲线看出,低铁浓度组(0-0.6mg/L)生长速率随着铁浓度增大而增大,尤其到达0.6mg/L,增长斜率最大,为藻细胞的最适生长浓度;中间铁浓度组(0.6-0.9mg/L),当浓度达0.9mg/L时,生长情况下滑,表现为叶绿素浓度、总蛋白、糖类含量的总体下降,尤其是高铁浓度组(1.4-4mg/L)时,藻类不堪高浓度铁负荷,生长每况愈下。缺铁组的RNA条带亮度最弱,Fe3+浓度为2.0mg/L时藻细胞密度最大,RNA浓度最高,条带最亮。这些变化与预期结果基本一致,即低浓度铁促进藻生长,反之抑制。鉴于淡水藻类研究甚少,前期实验已实现了FurC的表达,本文选择铁调控路径中发挥主要作用的FurA为主要研究对象,结合生物信息学方法,对鱼腥藻PCC7120中的铁摄取机制基础研究进一步完善及应用的推广,具有一定意义。
其他文献
书法这一图像化媒介将观看与阅读融二为一,是《琵琶行》传播与接受的重要一翼。一方面推动《琵琶行》的经典化地位,另一方面也促进其由经典文学走向更为大众所接受的通俗文艺
以必修模块自然环境要素内容教学为例,分析高中地理新课程实验中出现的"反弹"现象。虽然有多种因素造成新课程实验中的"反弹",高中地理课程内容标准的定位和结构编制过程中形
改革开放30多年来,我国先后提出来“市场多元化”、“大经贸”、“以质取胜”等的经贸战略,十八届三中全会党的新一届领导人提出全面深化改革的强烈口号,并于2013年建设我国
NPV(净现值)法作为传统投资决策方法,虽然有其固有优势,但是在不确定性环境中,实物期权法显得更为合理。本文通过对NPV法与实物期权法在投资决策中的比较分析,说明实物期权法
中心静脉置管(CVC)是当今临床上不可替代的静脉输液技术,但存在与导管相关的有症状或无症状血栓形成是严重影响CVC安全应用的主要并发症之一,而临床上对CVC后相关血栓并发症
对采自沱沱河盆地通天河剖面渐新世雅西措群和中新世五道梁群地层中的湖相灰岩和白云岩样品进行了稀土元素和微量元素分析。研究结果表明,湖相碳酸盐岩稀土元素总量(∑REE)变
本文以发展激光诱导击穿光谱(LIBS)技术为目标。采用Nd:YAG激光器输出的纳秒脉冲激光激发国家标准土壤样品,产生等离子体,由光栅光谱仪和光电检测系统记录样品元素的发射光谱,研
<正>德清县在社会转型期,对改革信访工作进行了探索和实践,建立了一体化信访机制,使信访工作真正起到为民解忧、维护社会和谐稳定的作用。
马克思主义哲学教育生活化,不仅仅是一个哲学命题、教育命题,还是一个文化命题。本文从文化角度对马克思主义哲学教育生活化进行了分析,认为马克思主义哲学教育生活化缘起于
公立医院可以在确保自身常规工作不会被影响的情况下,可以有效利用本医院在人才、资金以及医学技术等方面的优势,采用相应的资金渠道来进行对外投资,从而获得投资效益,可将获