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目的：探讨糖尿病患者血管内皮祖细胞(EPCs)中谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性的改变及银杏叶提取物(GBE)对EPCs的保护作用。方法：选取南京军区南京总医院内分泌科住院2型糖尿病患者20例为实验组；健康体检者10例为对照组。实验组和对照组分别设为五个小组,即：A1组为空白组(不加药物干预),B1组GBE浓度为6.25mg/L, C1组GBE浓度为12.5mg/L,D1组GBE浓度为25mg/L, E1组GBE浓度为50mg/L。对照组以同样方法分为A2、B2、C2、D2, E2。采集实验组和对照组清晨空腹外周血20ml,采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Mononuclear cells, MNCs),将其接种于M199完全培养基(含20%胎牛血清、VEGF10ug/L、IGF-12ug/L、bFGF2ug/L、 EGF10ug/L、青-链霉素500mg/L)中诱导培养。每日在倒置相差显微镜下观察细胞的形态学变化,评估其生长状况。细胞培养第7天时行染色鉴定,在荧光倒置显微镜下观察其成色反应,胞浆摄取Dil-acLDL显示红色荧光,胞膜结合FITC-UEA-1显示绿色荧光,经FITC-UEA-1和Dil-acLDL孵育后显示黄色荧光的双染色阳性细胞,即为正在分化的EPCs。细胞培养第6天时进行药物干预,实验组或对照组中各加入含GBE0mg/L、6.25mg/L、12.5mg/L、25mg/L、50mg/L的M199培养基,于37℃培养箱中孵育24h后,分光光度计检测上清液GPX活性,酶标仪检测细胞Caspase-3活性。实验所得数据采用SPSS18.0软件进行分析,计量资料以均数±标准差(X±S)表示,组内资料自身前后比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),组间资料比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果：1. EPCs形态学观察和染色鉴定：刚分离的单个核细胞,呈小圆形,培养2天后,细胞贴壁,培养3天形成从中间向外放射的细胞集落,培养6天细胞长成典型的长梭形、双极杆状,部分细胞首尾相连成条索状,形成血管网状样结构。细胞培养7天时,行染色鉴定,胞浆摄取Dil-acLDL显示红色荧光,胞膜结合FITC-UEA-1显示绿色荧光,经FITC-UEA-Ⅰ和Dil-acLDL孵育后显示黄色荧光的双染色阳性细胞,即为正在分化的EPCs。2.GBE对GPX活性的影响：相同GBE浓度时,实验组EPCs中GPX的活性与对照组相比明显降低(P<0.05)；对照组在GBE12.5mg/L、25mg/L、50mg/L和实验组在GBE25mg/L、50mg/L浓度时的GPX活性较未加GBE时明显增加(P<0.01或P<0.05),且表现为GBE浓度越大,GPX活性越强。3.GBE对Caspase-3活性的影响：相同GBE浓度时,实验组EPCs中Caspase-3的活性与对照组相比明显升高(P<0.01或P<0.05)；对照组在GBE25mg/L、50mg/L和实验组在GBE12.5mg/L、25mg/L、50mg/L浓度时的Caspase-3活性与未加GBE时相比,明显降低(P<0.05或P<0.01),且表现为GBE浓度越大,Caspase-3活性越低。结论：糖尿病患者外周血EPCs生长缓慢,数目减少,细胞内GPX的活性降低,Caspase-3活性增加,而中药GBE可以提高GPX活性,降低Caspase-3的活性,减轻氧化应激导致的细胞毒性,抑制EPCs氧化损伤及其凋亡,为治疗糖尿病,尤其是糖尿病血管病变提供依据。