第一部分单侧输尿管梗阻诱导对侧肾脏细胞焦亡的短期效应目的:观察短期UUO大鼠对侧肾脏细胞焦亡的程度及信号调控。方法:雄性Wistar大鼠随机分为4组:假手术组（Sham组）、模型组（UUO组）、依普利酮组（UUO+EPL组）和中药组（UUO+TCM组）;假手术组仅游离左侧输尿管,其他组结扎并切断左侧输尿管。术后第1日开始,每日分别给予依普利酮100mg·kg^-1·d^-1或化瘀解毒中药免煎颗粒1.92g·kg^-1·d^-1,连续10日;取梗阻对侧肾脏（右侧肾）备检。HE及TUNEL染色观察对侧肾组织病理改变及DNA损伤;免疫组化法和蛋白免疫印迹观察肾组织NLRP3、caspase-1、IL-1β、SGK-1、NF-κB（p65）蛋白表达;RT-PCR检测NLRP3、caspase-1、IL-1β基因转录;免疫组化检测巨噬细胞标志物F4/80表达;免疫荧光观察F4/80与NLRP3共表达。以上数据以均数±标准差表示,采用正态性检验及单因素方差分析、SNK-q检验,以P<0.05为检验水准。结果:1.对侧肾脏病理改变及DNA损伤情况Sham组肾小管形态基本正常,TUNEL阳性细胞数量较少;UUO组炎细胞浸润,可见部分肾小管上皮细胞形态不完整,染色质聚集,细胞溶解,TUNEL阳性细胞数量明显高于假手术组（P<0.001）;（UUO+EPL）组仅在血管周围出现少量炎细胞,TUNEL阳性细胞数量显著低于UUO组（P<0.001）。2.免疫组化、蛋白免疫印迹及RT-PCR检测NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白和基因表达:三种蛋白主要表达于远端小管胞浆,NLRP3在肾间质也有表达;UUO组NLRP3和caspase-1蛋白表达明显高于Sham组（P<0.01）,而依普利酮干预后其表达均明显下降（P<0.01）;UUO组IL-1β表达高于Sham组（P<0.05）,依普利酮干预后表达下调（P<0.05）。3.蛋白免疫印迹检测SGK-1、NF-?B（p65）表达与Sham组比较,UUO组SGK-1、NF-?B（p65）表达水平显著增高（P<0.001）;与UUO组比较,（UUO+EPL）组两者表达均降低（P<0.01,P<0.05）。4.免疫组化观察巨噬细胞浸润数量F4/80阳性细胞主要分布于肾间质。Sham组阳性细胞数目很少,UUO组明显增多（P<0.001）;与UUO组相比,依普利酮干预后显著减少（P<0.01）。5.免疫荧光法观察NLRP3和F4/80共表达共表达阳性区域主要集中在肾间质,UUO组细胞数量较Sham组增多（P<0.001）;与UUO组比,依普利酮干预后共表达细胞数目明显减少（P<0.01）6.化瘀解毒中药对细胞焦亡的影响与UUO组相比,（UUO+TCM）组TUNEL阳性细胞明显减少。Western blot结果显示,UUO组对侧肾脏NLRP3、caspase-1、IL-1β、NF-κB（p65）及SGK-1表达较Sham组明显增强,给予化瘀解毒中药干预后表达明显下调。小结:短期UUO可以诱导对侧肾损伤,与血清醛固酮有关;醛固酮通过SGK-1/NF-κB信号通路,激活NLRP3/caspase-1/IL-1β途径诱导对侧肾脏细胞焦亡。盐皮质激素受体阻断剂及化瘀解毒中药可以抑制肾脏细胞焦亡。第二部分细胞焦亡在输尿管梗阻诱导慢性肾衰竭进展中的作用及化瘀解毒中药的干预机制目的:采用180天UUO大鼠模拟长期输尿管梗阻致肾衰竭的病理过程,解析长期梗阻诱导慢性肾衰竭的机制,验证“浊毒伤肾”的病机及化瘀解毒中药的保护作用。方法:Wistar大鼠随机分为5组:假手术组（Sham组）、单侧肾切组（Cut组）、模型组（UUO组）、螺内酯组（Spi组）和中药组（TCM组）。UUO过程同第一部分摘要。螺内酯组与中药组从术后第1天开始,分别口服螺内酯(20mg·kg^-1·d^-1)或化瘀解毒中药(免煎颗粒1.92g·kg^-1·d^-1),连续服用180天。第180日取血液、尿液及梗阻对侧肾脏备检。检测大鼠肾体比值、血压变化、肾功能（Cr、BUN）;HE和Masson染色观察肾脏病理改变;酶联免疫吸附实验检测血清醛固酮水平,免疫组化观察MR表达,蛋白免疫印迹检测SGK-1、NF-κB（p65）表达;TUNEL染色观察DNA损伤;免疫荧光和蛋白免疫印迹实验检测NLRP3、caspase-1、IL-1β表达。数据统计同第一部分摘要。结果:1.一般情况检测输尿管梗阻大鼠和单侧肾切大鼠的肾体比值明显高于Sham组（P<0.001）;术后5、6月份UUO组收缩压高于Sham组,而Spi组和TCM组与UUO组比较,收缩压明显下降;Cut组与Sham组比较收缩压无明显差异。2.肾功能及病理检测与Sham组比较,UUO组血肌酐、尿素氮水平都明显升高（P<0.001）;与UUO组比较,螺内酯或中药干预后两者水平下降明显（P<0.01,P<0.001）;Cut组与Sham组比较,两者无显著差异。HE染色结果显示,Sham组肾小球、肾小管形态规整,小管间质有少量炎细胞浸润;UUO组有些部位可观察到大量炎细胞聚集,部分小管细胞萎缩、脱落、空泡化、核固缩、小管形态欠完整、管腔扩大;Spi组和TCM组仍可见炎细胞浸润但数量减少;Cut组肾小球及肾小囊形态正常,但小管上皮细胞轻度肿胀,小管横截面积增加。Masson染色显示,UUO组肾间质胶原沉积明显多于Sham组,呈条索状或片状;Spi组和TCM组肾间质胶原沉积少于UUO组;Cut组与Sham组相比无显著差异。3.血清醛固酮、肾组织MR及醛固酮效应因子检测ELISA检测血清醛固酮显示,UUO组明显高于Sham组（P<0.05）;Spi组、TCM组与UUO组比较无显著差异;Cut组血清醛固酮水平与Sham组相比,亦无明显差异。免疫组化检测NR3C2显示,UUO组MR入核数量明显多于Sham组,主要分布于远端小管;Spi组和TCM组MR活化数量少于UUO组。Western blot检测醛固酮效应因子显示,UUO组SGK-1和NF-κB（p65）表达明显强于Sham组（P<0.001,P<0.01）;Spi组和TCM组的表达明显减弱（P<0.001,P<0.05）。4.焦亡标记及信号通路检测TUNEL染色检测DNA损伤显示UUO组TUNEL阳性细胞集中于远端小管,数量多于Sham组（P<0.001）;Spi和TCM组阳性细胞数目减少（P<0.001）。免疫荧光和蛋白免疫印迹检测焦亡信号通路:NLRP3、caspase-1、IL-1β三种蛋白均主要表达于肾小管细胞胞浆中,UUO组表达明显强于Sham组（P<0.001,P<0.01,P<0.05）;两干预组NLRP3、caspase-1、IL-1β表达弱于UUO组（P<0.001,P<0.01,P<0.05）。小结:长期输尿管梗阻引起对侧肾脏病理及功能改变,与盐皮质激素受体活化导致的细胞焦亡有关。化瘀解毒中药通过下调NLRP3/caspase-1/IL-1β表达而抑制肾脏细胞焦亡减轻炎症反应,延缓CKD进展。第三部分醛固酮诱导HK2细胞焦亡及化瘀解毒中药血清干预效果研究目的:观察醛固酮诱导人近端小管上皮细胞焦亡的作用与信号调控,验证化瘀解毒中药血清的干预效果。方法:制备含中药血清,人近端肾小管细胞HK2,分为4组:对照组（Cont）、醛固酮组（Ald,1μmol/L）、依普利酮组（EPL,1μmol/L醛固酮和10μmol/L依普利酮）、中药组（TCM,10%中药血清和1μmol/L醛固酮）。TUNEL检测细胞DNA损伤,生化分析仪检测细胞上清液LDH活性,免疫荧光和/或Western blot检测MR、SGK-1、NF-κB（p65）、NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白表达。数据统计同第一部分摘要。结果:1.MR活化及醛固酮效应因子检测受到醛固酮刺激后MR活化,表现为从胞质进入细胞核,Cont组MR活化细胞数量较少;Ald组MR活化细胞数目明显增多;与Ald组比较,EPL组和TCM组中MR活化数量明显减少。Ald组SGK-1和NF-κB（p65）蛋白表达显著强于Cont组（P<0.001,P<0.05）;与Ald组比较,EPL组和TCM组两种蛋白表达水平显著降低（P<0.001,P<0.05）。2.TUNEL染色、LDH活力测定分别检测DNA和细胞膜损伤免疫荧光显示TUNEL阳性HK2细胞为绿色荧光;Cont组TUNEL阳性细胞数目很少,Ald组与Cont组比较,DNA损伤细胞数量明显增长;EPL和TCM组阳性细胞明显减少。Ald组细胞培养上清液LDH活力明显高于Cont组（P<0.001）。3.免疫荧光及蛋白免疫印迹检测焦亡信号NLRP3蛋白位于胞质中,显示为绿色荧光;Ald组NLRP3相对表达量明显高于Cont组（P<0.01）;与Ald组比较,EPL组和TCM组相对表达均显著下降（P<0.01）。Caspase-1和IL-1β在胞质显示绿色荧光,Ald组caspase-1及IL-1β表达均明显强于Cont组（P<0.01,P<0.05）;给予依普利酮及含中药血清后表达下调（P<0.01,P<0.05）。小结:醛固酮激活MR,通过NLRP3/caspase-1诱导HK2细胞焦亡;依普利酮和中药血清减轻HK2细胞焦亡与抑制MR活化相关。结论:1.单侧输尿管梗阻可以引起对侧肾脏细胞焦亡;2.单侧肾梗阻随着时间延长可以导致对侧肾脏结构和功能改变,进展为肾衰竭;3.单侧肾梗阻诱导慢性肾衰竭的机制与醛固酮有关,盐皮质激素受体活化在其中发挥着关键作用,给以盐皮质激素受体阻断剂可以减轻肾脏损伤;4.醛固酮刺激SGK-1/NF-κB高表达,激活NLRP3/caspase-1/IL-1β通路,参与细胞焦亡的调控;5.化瘀解毒中药通过调控SGK-1/NF-κB信号通路,下调NLRP3/caspase-1/IL-1β表达,减轻细胞焦亡,延缓CKD进展。