内皮素-1(ET-1)是由内皮细胞释放的具有强血管收缩作用的多肽,对平滑肌细胞有促增殖的作用。体外研究低氧环境下鸡胚肺动脉内皮细胞ET-1的产生,及其对肺动脉平滑肌的作用,进而为肉仔鸡腹水症和人类肺动脉高压发病机制的研究提供理论依据。本研究拟采用组织贴块法体外分离培养鸡胚肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞,利用免疫荧光技术对这两种分离培养的细胞进行鉴定。利用自制的低氧小室对这两种细胞进行低氧处理,采用放免法于低氧6h、12h、24h三个时间点检测内皮细胞ET-1的释放量,分别收集培养24h后的常氧内皮细胞培养液(NCM)和低氧内皮细胞培养液(HCM),-20℃保存。提取细胞总RNA进行反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)观察低氧环境下内皮细胞ET-1 mRNA和平滑肌细胞ETAR mRNA的表达。将平滑肌细胞分为低氧组(H)、低氧+常氧内皮细胞培养液(H+NCM,NCM终浓度为体积分数50%)组、低氧+低氧内皮细胞培养液(H+HCM,HCM终浓度为体积分数50%)组、低氧+低氧内皮细胞培养液+BQ123(H+HCM+B)组,BQ123(终浓度5μmol/ L-1)是内皮素A受体拮抗剂。CCK-8检测平滑肌细胞的增殖,Fura-2/AM检测平滑肌细胞内钙离子浓度。实验结果如下:(1)采用组织贴块法培养鸡胚肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞,经免疫荧光技术鉴定原代培养的细胞是我们需要的内皮细胞和平滑肌细胞。(2)内皮细胞经低氧处理后分泌ET-1的量较常氧环境下显著增加,表明低氧可刺激内皮细胞对ET-1的分泌。(3)平滑肌细胞内钙离子浓度,H+NCM组显著高于H组,H+HCM组显著高于H+NCM组,表明内皮细胞常氧和低氧培养液都可促进平滑肌细胞内钙离子浓度升高,H+HCM组显著高于H+HCM+B组,BQ123可显著抑制内皮细胞培养液促平滑肌细胞内钙离子浓度升高的作用。(4)H+NCM组平滑肌细胞的增殖显著高于H组,H+HCM组显著高于H+NCM组,表明内皮细胞常氧和低氧培养液都可促进平滑肌细胞增殖,H+HCM组显著高于H+HCM+B组,BQ123可显著抑制内皮细胞培养液促平滑肌细胞增殖的作用。(5)内皮细胞ET-1 mRNA和平滑肌细胞ETAR mRNA在低氧条件下表达都显著升高,表明低氧可刺激两者mRNA的表达。采用组织贴块法成功培养出鸡胚肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞,为以后禽类疾病的研究提供了良好的细胞模型。综合实验结果推测出低氧引起肉仔鸡肺动脉高压的发生机制是低氧导致内皮细胞ET-1mRNA和平滑肌细胞ETAR mRNA表达量升高,内皮细胞ET-1mRNA表达升高引起ET-1分泌增加,在低氧环境下的结果就是导致平滑肌细胞内钙离子浓度的升高和平滑肌细胞的增殖。禽类内皮细胞源性ET-1参与血管壁的重构,进而参与禽类肺动脉高压的形成,即腹水症的发生。