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第一部分:α7nAchR激动剂DMXBA改善CRS小鼠学习记忆损伤和抑郁样行为目的:检测慢性束缚应激(Chronic restraint stress,CRS)模型对昆明小鼠认知功能及抑郁样行为的影响,烟碱型胆碱受体α7亚型(α7n Ach R)激动剂DMXBA对CRS小鼠行为学的影响。方法:采用慢性束缚应激(Chronic restraint stress,CRS)模型,造模后第11天给药,腹腔给予α7n Ach R激动剂DMXBA 4mg/kg/d,或联合给予拮抗剂α-BGT 1μg/kg/d,连续给药至第21天。Morris水迷宫实验(Morris Water Maze,MWM)和新事物认知(Novel-object recognition,NOR)实验观察小鼠的认知功能,糖水偏好(Sucrose preference test,SPT)实验,强迫游泳(Forced swim test,FST)和悬尾实验(Tail suspansion test,TST)实验观察小鼠的抑郁样行为。结果:(1)MWM结果显示,与对照组相比,前4天训练期CRS小鼠逃逸潜伏期第3、4天明显延长,第5天检测期目标象限时间显著缩短;NOR实验结果显示,对新事物的认知指数与对照组比CRS小鼠显著降低,以上结果提示CRS造成小鼠的学习记忆损伤。(2)SPT实验结果显示,CRS小鼠糖水摄入率与对照组比显著降低;FST和TST结果显示,CRS小鼠累计不动时间显著增加,以上结果提示CRS引发小鼠抑郁样行为。(3)给予DMXBA(4mg/kg),CRS小鼠逃逸潜伏期明显缩短,在目标象限停留的时间增加,新事物认知指数增加,α-BGT(1μg/kg)能逆转DMXBA(4mg/kg)的上述作用。(4)DMXBA(4mg/kg)显著增加CRS小鼠糖水摄入率及降低应激小鼠的累计不动时间;给予α-BGT(1μg/kg)能逆转DMXBA(4mg/kg)的上述作用。结论:DMXBA改善CRS小鼠的学习记忆损伤和抑郁样行为。第二部分:α7nAchR激动剂DMXBA对CRS小鼠神经元损伤的影响目的:观察慢性束缚应激对小鼠海马神经元形态和树突棘数目的的影响,观察DMXBA(4mg/kg)是否对神经元损伤有改善作用。方法:观察海马神经元的形态采用尼氏染色的方法,检测海马CA1区树突棘密度采用高尔基银染的方法。结果:(1)尼氏染色结果显示,CRS组与对照组相比,海马缩小,海马CA1区细胞皱缩,胞核变形,浓染。DMXBA(4mg/kg)显著缓解CRS所致的海马CA1区神经细胞损伤,而α-BGT(1μg/kg)能拮抗DMXBA(4mg/kg)对海马神经元损伤的改善作用。(2)高尔基结果显示,树突棘密度CRS小鼠与对照组相比,海马CA1区显著降低,DMXBA(4mg/kg)显著逆转树突棘的丢失,而α-BGT(1μg/kg)能拮抗DMXBA(4mg/kg)的保护作用。结论:DMXBA改善CRS小鼠神经元损伤。第三部分:α7n Ach R激动剂DMXBA对CRS小鼠脑组织炎症反应的调节作用及机制目的:观察CRS小鼠海马两条炎症通路ACh抗炎信号通路和TLR4/NF-κB促炎信号通路蛋白表达变化情况,检测下游促炎细胞因子释放情况,并探讨DMXBA(4mg/kg)对脑组织炎症反应的影响。方法:酶联免疫吸附法检测海马中促炎因子TNF-α和IL-1β的分泌情况。Western Blot检测α7n Ach R,CHAT,STAT3,TLR4,NF-κB,GFAP及Iba-1蛋白的表达规律,比色法检测海马组织ACh E活性。结果:(1)Western Blot检测了海马组织中蛋白变化,结果显示CRS小鼠TLR4、My D88蛋白表达增加,核蛋白NF-κB的表达降低,促炎因子TNF-α和IL-1β的释放增加,中枢Gail和AST增殖,DMXBA(4mg/kg)处理明显下调CRS小鼠海马的TLR4/NF-κB信号通路,海马促炎因子释放显著减少,中枢激活的Gail及AST被抑制,给予α-BGT(1μg/kg)能拮抗DMXBA(4mg/kg)的上述作用。(2)CRS小鼠转录因子STAT3核蛋白表达显著降低,海马组织中CHAT、α7n Ach R表达水平明显升高,ACh E表达水平无明显变化,给予DMXBA(4mg/kg)明显降低ACh E水平,但对应激小鼠海马组织中STAT3、CHAT、α7n Ach R水平无明显影响。结论:DMXBA(4mg/kg)下调CRS小鼠海马的TLR4/NF-κB信号通路,同时激活CRS小鼠海马的Ach抗炎信号通路,能抑制CRS诱导的小鼠脑组织炎症反应。第四部分:α7n Ach R激动剂DMXBA对CRS小鼠Treg细胞数目的影响目的:观察CRS小鼠脾脏及中枢调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)数目变化和外周血中促炎因子释放变化,探究DMXBA(4mg/kg)对外周炎症因子和Treg细胞数目的影响。方法:脾脏组织中Treg细胞数目的变化运用流式细胞术检测。Western Blot检测脑组织Treg细胞标志蛋白Foxp3+的变化。外周血促炎因子TNF-α和IL-1β的变化情况运用酶联免疫吸附法检测。结果:CRS21d小鼠脾脏组织Treg细胞数量显著降低,脑组织Foxp3+表达也显著降低,给予DMXBA(4mg/kg)能升高CRS21d小鼠脾脏组织Treg细胞数量,并促进脑组织Foxp3+表达,给予α-BGT(1μg/kg)能拮抗DMXBA(4mg/kg)的上述作用。CRS7d后小鼠外周血TNF-α和IL-1β水平增加,但CRS14d和CRS21d小鼠外周血NF-α和IL-1β水平没有显著改变,DMXBA(4mg/kg)对TNF-α和IL-1β的释放无明显影响。结论:DMXBA(4mg/kg)上调CRS21d小鼠外周和中枢Treg细胞含量。