鲎素（tachyplesin）为鲎血液中抗菌肽的总称,具有广谱的杀菌、抑病毒和抗肿瘤作用,因此,已引起国内外学者的广泛关注。但天然鲎的数量有限,人工养殖难度大,利用从鲎血细胞中提取的鲎素天然制品远不能满足需求,而利用分子生物学技术,开发可生产鲎素的工程菌株,是一个切实可行的办法,具有广阔的应用前景。因此,本研究利用经典的分子生物学手段将改造过的中国鲎抗菌肽polyphemusinⅡ的编码序列引入大肠杆菌中表达,以期获得可高效表达抗菌肽polyphemusinⅡ工程菌,使其产业化生产变为可能。本研究的第一部分开展了中国鲎抗菌肽polyphemusinⅡ基因改造和克隆的工作。采集中国鲎的血液,用Trizol试剂提取鲎阿米巴血细胞的总RNA。根据NCBI已发表的美洲鲎抗菌肽polyphemusinⅡ氨基酸序列,设计引物时对原抗菌肽基因进行改造:在其开放阅读框末端添加了Asn密码子,使抗菌肽羧基末端酰胺化,旨在提高其稳定性和抗菌活性,随后以RT-PCR获得经改造的抗菌肽目的片段rr,再将其克隆于载体pMD18-T,并测序,筛选得到中国鲎抗菌肽polyphemusinⅡ基因的阳性克隆。第二部分是原核表达载体的构建、表达及检测。将重组克隆质粒pMD18-T-rr用NdeⅠ、EcoRⅠ进行双酶切消化后,与经相应限制性内切酶消化处理的原核表达载体pET-28c（+）进行连接,并转化E.coli JM109感受态细胞,经PCR和测序确证,得到阳性重组质粒,在宿主菌E.coli..BL21（DE3）中,进行诱导表达。SDS-PAGE检测结果发现表达菌的裂解产物与对照菌相比出现了一条新的蛋白条带,其大小约为2.5KD。薄层扫描结果表明,表达的抗菌肽蛋白占菌体总蛋白的27.21%。经Western blot检测,大约在2.5KD处出现特异性的反应带,说明该表达产物可与天然鲎素阳性血清发生特异性反应.将提取包涵体得到的抗菌肽初提物作抑菌实验,结果发现其在体外表现出明显的抗菌活性。综上所述,本研究成功地将抗菌肽polyphemusinⅡ基因加以改造,并转化大肠杆菌表达,获得具有高效抗菌活性的表达产物,从而为鲎素基因工程研究及其产业化开发和应用奠定了基础。