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2009--2010年连续两年间，从山东烟台，日照，胶南，潍坊等沿海地区采集发病的大菱鲆、牙鲆、半滑舌鳎等海水养殖鱼类样品，对可疑病原菌进行了分离、纯化及鉴定，同时对分离的细菌进行药敏实验；目的是了解病原菌的种类以及评价细菌耐药性产生情况，同时为养殖用药提供合理建议。对从采集的样品中分离以及实验室保藏的5株病原菌—鳗弧菌（Vibrioanguillarum）、哈维氏弧菌（V. harveyi）、副溶血弧菌（V. parahaemolyticus）、杀鲑气单胞菌（Aeromonas salmonicida）和腐败希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）进行了毒力评价，并制备了5株菌的多克隆抗体，建立了5株菌的间接ELISA检测方法，同时进行了应用测试，为开展5株菌的后续研究提供了基础。细菌鉴定主要采用16S rDNA序列测序法，同时配合细菌全脂肪酸鉴定法。检测结果显示，从病鱼样品中分离到的细菌主要是假交替单胞菌和弧菌，分离到的常见病原菌有哈维氏弧菌（V. harveyi）、费氏弧菌（V. fischeri）、灿烂弧菌（V.splendidus）、肠道弧菌（V. ichthyoenteri）。对分离的细菌应用药敏纸片法进行耐药性测试。结果显示：2009年分离的37株菌对青霉素G、洁霉素和四环素耐药性较强，耐药菌所占比例分别达到了100%、100%和97.3%；对阿齐霉素、利福平和多粘菌素B较敏感，耐药菌所占比例分别为16.22%、13.51%和0%，因此养殖病害可能用多粘菌素B效果较好。2010年分离的43株菌对青霉素G、洁霉素、四环素和先锋霉素Ⅵ耐药性较强，耐药菌所占比例分别达到了100%、97.67%、97.67%和95.34%；对氟哌酸和氯霉素较敏感，耐药菌所占比例分别为20.93%和4.65%。相对2009年的耐药性统计结果，细菌不敏感的抗生素种类在原来三种的基础上增加了一种先锋霉素Ⅵ，细菌敏感的抗生素由三种降为两种，提示细菌耐药性增强。病原菌的毒力评价通过攻毒大菱鲆，分析15d后的LD50确定。实验结果显示：鳗弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、杀鲑气单胞菌和腐败希瓦氏菌对大菱鲆的LD50值分别为7.00×102、2.17×106、3.89×106、3.16×106、3.73×107CFU，证明5株菌均是有毒力的，其中鳗弧菌毒力最强。利用制备的抗鳗弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、杀鲑气单胞菌和腐败希瓦氏菌的多克隆抗体建立了该5株病原菌的间接ELISA快速检测方法。研究结果显示：鳗弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、杀鲑气单胞菌和腐败希瓦氏菌的抗血清效价分别为1:2048000、1:1024000、1:16000、1:16000和1:128000；抗血清检测抗原的灵敏度依次为：104、105、107、108和106CFU/ml。交叉反应实验发现，三株弧菌之间存在较明显的交叉反应；对从多个海水鱼类养殖场采集的发病鱼样中分离的可疑病原菌进行间接ELISA检测，在胶南的牙鲆和黑鲪样品中检出1株Shewanella putrefaciens阳性菌，2株V. harveyi阳性菌；在无棣的半滑舌鳎鱼样中检出1株V. parahaemolyticus/V. harveyi阳性菌。根据菌株抗血清间的交叉反应，推测弧菌间存在着共同抗原，该结果为后续疫苗开发提供参考。