论文部分内容阅读
研究背景:以奥沙利铂为基础的FOLFOX和CAPEOX方案是治疗结直肠癌的一线化疗方案,然而如何克服耐药,增强奥沙利铂疗效仍是目前亟待解决的问题。大量研究显示化疗疗效不仅与化疗药物本身,还与肿瘤微环境紧密相关。髓源抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是肿瘤微环境中一类重要的免疫抑制性细胞群体,其具有向M1/M2型巨噬细胞分化能力,进而分别产生抗瘤和促瘤作用。因此,奥沙利铂对MDSCs的分化调控可能与化疗疗效密切相关。而Toll样受体(Toll-likereceptors,TLRs)激动剂通过激活免疫系统而在肿瘤治疗中产生重要作用。近年来,TLRs 7/8激动剂,瑞喹莫德(resiquimod,R848)被发现可以通过减少肿瘤局部MDSCs浸润并促进MDSCs向M1型巨噬细胞分化而增强抗肿瘤免疫,提高化疗疗效。因此,本研究旨在明确奥沙利铂对MDSCs的分化调节作用,并首次提出以R848作为免疫激活剂改善奥沙利铂疗效的新方案。方法1.奥沙利铂抑制MDSCs向M1型巨噬细胞分化:构建CT26荷瘤小鼠模型,通过记录肿瘤体积、肿瘤重量等评估奥沙利铂疗效,体内、体外通过流式细胞术、免疫荧光等检测奥沙利铂对肿瘤部位MDSCs向M1/M2型巨噬细胞分化的影响。2.R848逆转奥沙利铂对MDSCs的异常分化调控:体外使用流式细胞术、免疫荧光等手段检测R848对奥沙利铂调节MDSCs分化的影响,使用流式细胞术检测R848对奥沙利铂杀伤肿瘤细胞的影响;构建CT26荷瘤小鼠模型,通过肿瘤体积测量、免疫组化等评估奥沙利铂联用R848的化疗疗效,并通过流式细胞术等检测其对肿瘤部位MDSCs浸润及分化影响。3.纳米药物PsePt及PsePt@R848表征:合成纳米药物PsePt及PsePt@R848,通过纳米粒度仪检测其平均粒径,多分散指数(Polydipersityindex,PDI)、Zeta电位,利用ICP-MS及高效液相色谱仪检测其载药量及药物释放情况。结果1.奥沙利铂抑制CT26荷瘤小鼠肿瘤生长,减少肿瘤局部MDSCs浸润的同时抑制其向M1型巨噬细胞分化;体外奥沙利铂同样抑制MDSCs向M1型巨噬细胞分化,并减少促炎因子TNF-α表达;2.R848逆转奥沙利铂对MDSCs的异常分化调控作用,促进MDSCs向M1型巨噬细胞分化,表达炎性因子TNF-α,IL-1β,并增强奥沙利铂对肿瘤细胞的杀伤作用;3.R848增强奥沙利铂对荷瘤小鼠体内肿瘤的杀伤作用,在进一步抑制肿瘤局部MDSCs浸润的同时促进其向M1型巨噬细胞分化。4.PsePt 及 PsePt@R848 的平均粒径,PDI,Zeta 电位分别为183.8±2.5nm,0.25±0.03,-25.1±2.2 mV和 225.9±17.4 nm,0.33±0.14和-20.7±0.9mV。体外释药实验显示两者均具有还原响应性,但对低PH及高氧化环境不敏感。结论1.奥沙利铂抑制MDSCs向M1型巨噬细胞分化;2.R848通过促进MDSCs向M1型巨噬细胞分化并增强奥沙利铂疗效;3.以奥沙利铂和R848为基础的纳米药物PsePt及PsePt@R848具有良好的纳米特性。