目的:肥胖是由于机体过多或异常的脂肪堆积引起能量代谢紊乱的病理状态。胰岛素抵抗(IR)是血脂异常、高血压、心脑血管疾病、葡萄糖耐受不良、2型糖尿病(T2DM)等一系列慢性疾病的基础,影响机体的整体代谢。高脂饮食中过多饱和脂肪酸的摄入导致肠道微生物结构发生了改变,损伤肠粘膜屏障,肠通透性增高,引起了内毒素(LPS)入血,LPS通过作用于细胞膜受体,激活多条细胞内信号转导途径,引起全身炎性反应,促进胰岛β细胞凋亡,影响胰岛素信号转导过程,引起胰岛素抵抗。LPS,被认为是肥胖与2型糖尿病的触发因素。肠屏障受损既是胰岛素抵抗肥胖恶化的结果,也是促进胰岛素抵抗发展的重要因素。肠上皮细胞及细胞间连接构成的肠黏膜机械屏障,为肠道多种防御屏障中最重要的屏障,而紧密连接(TJ)是最为重要的细胞间连接方式,紧密连接蛋白为TJ的重要组成成分,其中Occludin、ZO-1蛋白是最主要的紧密连接蛋白,在维持肠道上皮细胞之间的连接时发挥重要作用。对胰岛素抵抗肥胖的早期干预一定程度上可以防止其发展成T2DM等代谢性疾病。本实验拟用电针联合热量控制对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗肥胖模型大鼠进行干预,观察其体重、Lee,s指数、胰岛素敏感性、血清内毒素含量、小肠黏膜组织状态改变以及小肠紧密连接蛋白表达,阐明电针联合热量控制对IR以及小肠屏障功能的影响,为临床运用电针联合热量控治制疗胰岛素抵抗肥胖提供实验依据。方法:造模:高脂饮食诱导IR肥胖模型,以体重、Lee,s指数、GIR作为评价造模成功的标准。8周龄SPF级Wistar雄性大鼠100只,按随机号码表法抽取20只给予普通饲料喂养,另80只给予高脂饲料喂养。喂养8周以后测量大鼠体重、Lee,s指数评价肥胖模型;随机抽取普通饲料喂养组大鼠4只、高脂饲料喂养组大鼠16只行高胰岛素-正葡萄糖钳夹术测量GIR,评价IR模型。同时符合该两种评价标准则表示成功造胰岛素抵抗肥胖模型。分组:选取达到肥胖标准的大鼠,随机分入模型组、电针组、热量控制组(热控组)、电针联合热量控制组(针加热控组),每组10只,正常组大鼠随机挑选10只,共5组。各组干预方法:正常组:正常大鼠,普通饲料喂养;模型组:高脂饲料喂养;电针组:高脂饲料喂养,予电针干预;热量控制组:予热量控制干预(每日称取记录模型组大鼠进食量,以同期模型组每日进食量的70%投喂大鼠为热量控制干预,并且单笼喂养。共计8周);电针联合热量控制组:予电针、热量控制干预。电针干预方法:取穴:足(后)三里、丰隆、关元、中脘;使用0.20×13mm一次性毫针,连接HANS LH202H型电针仪电极,参数设置:2Hz,1m A,连续波。每日电针10 min,每周治疗3次。总疗程为8周。指标检测:于干预的0、2、4、6、8周测量所有大鼠体重、肛鼻长,计算Lee,s指数;于干预的第6周检测所有大鼠腹腔糖耐量(IPGTT)和腹腔胰岛素耐量(IPITT);治疗结束后,每组随机抽取3只大鼠行高胰岛素-正葡萄糖钳夹术检测GIR,其余大鼠酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清胰岛素、内毒素含量,HE染色法检测小肠组织肠黏膜病理状态的改变,蛋白印迹法(WB)检测小肠组织紧密连接蛋白Occludin表达,免疫组化法检测小肠组织紧密连接蛋白Occludin、ZO-1蛋白表达。结果:1.对体重与肥胖程度的影响:与模型组相比,第4周以后,电针联合热控组大鼠体重明显降低(P<0.01);第6周时,三个干预组体重与模型组相比趋势下降(P<0.01);第8周干预后,电针联合热控组大鼠体重低于电针组、热控组(P<0.01)。Lee,s指数的变化情况与体重同步。2.对胰岛素敏感性的影响:(1)对腹腔糖耐量的影响:在腹腔注射葡萄糖15min后,所有大鼠血糖迅速上升;三个干预组在第30min至第120min时血糖值均低于模型组(P<0.01);在第30min以后电针联合热控组血糖值均低于电针组、热控组(P<0.05);电针组、热控组之间差异不具有统计学意义。(2)对腹腔胰岛素耐量的影响:与正常组相比,模型组大鼠从第15min直至第120min观察结束,血糖值均高于正常组(P<0.01);与模型组相比,三个干预组大鼠在第15min至第120min时血糖值均较低(P<0.01);与电针组相比,在第30、60min时电针联合热控组血糖值较低(P<0.05);与热控组相比,在第60min时电针联合热控组血糖值较低(P<0.05);电针组、热控组之间差异不具有统计学意义。(3)对葡萄糖输注率的影响:经过8周的干预之后,与正常组相比,模型组GIR显著降低(P<0.01);与模型组相比,三个干预组GIR显著升高(P<0.01);与电针组、热控组相比,电针联合热控组GIR降低(P<0.05);电针组与热控组之间无统计学差异。(4)对血清胰岛素的影响:8周的干预之后,与正常组相比,模型组胰岛素抵抗肥胖大鼠血清INS含量显著升高(P<0.01);与模型组相比,电针组、热控组、电针联合热控组胰岛素抵抗肥胖大鼠血清INS含量显著降低(P<0.01);与电针组、热控组相比,电针联合热控组胰岛素抵抗肥胖大鼠血清INS含量降低(P<0.05);电针组与热控组无统计学差异。3.对血清LPS的影响:经过8周的干预之后,与正常组相比,模型组胰岛素抵抗肥胖大鼠血清LPS含量显著升高(P<0.01);与模型组相比,三个干预组大鼠胰岛素抵抗肥胖大鼠血清LPS含量显著降低(P<0.01);与电针组、热控组相比,电针联合热控组胰岛素抵抗肥胖大鼠血清LPS含量降低更明显(P<0.05);电针组与热控组无统计学差异。4.对小肠黏膜组织状态的影响:三个干预组大鼠肠绒毛破坏程度较模型组轻,Chiu’s评分较低(p<0.05),电针联合热量控制组Chiu’s评分最低,小肠黏膜破坏程度最轻;电针组与热控组无统计学差异。5.对小肠组织紧密连接蛋白的影响:模型组大鼠小肠Occludin、ZO-1的蛋白表达较正常组显著下调(P<0.01);与模型组相比,电针,热控,电针联合热控组Occludin、ZO-1的蛋白表达上调(P<0.01);电针联合热控组Occludin、ZO-1的蛋白表达水平高于电针组、热控组(P<0.01);与热控组相比,电针组Occludin、ZO-1的蛋白表达较高(P<0.05)。结论:1.热量控制、电针、电针联合热量控制均能减轻胰岛素抵抗肥胖大鼠的体重、肥胖程度,增强胰岛素敏感性,保护肠黏膜,上调小肠组织紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达,维护肠屏障功能。2.电针与热量控制联合干预在减轻体重、降低其肥胖程度、改善胰岛素敏感性、降低血清内毒素水平及维护小肠屏障功能方面明显优于单独热控干预以及单独电针干预,电针联合热量控制干预在以上方面发挥了协同作用。3.电针与热量控制可能是通过改善肠屏障功能,减少内毒素释放,减轻肠道炎症状态,发挥改善胰岛素敏感性的作用,这是电针与热量控制发挥协同效应改善胰岛素抵抗肥胖状态的可能机制。4.本实验观察电针联合热量控制对胰岛素抵抗肥胖大鼠肠屏障功能的影响限于机械屏障,其化学屏障、免疫屏障及生物屏障未能在本实验中进行观察,各屏障功能相互作用密不可分,在以后的研究中可以进一步观察、研究电针联合热量控制对其它屏障功能的影响以及与治疗胰岛素抵抗肥胖之间的关系。