1.研究背景肿瘤转移是威胁人类健康的第一大问题,90%以上的肿瘤病人死于肿瘤远处转移。多数患者在初诊时并未出现明显的肿瘤转移,随着肿瘤的进展而出现肿瘤的转移,但目前对肿瘤转移的相关机制仍在探索中。目前已经明确,肿瘤细胞通过外渗作用进入周围组织是肿瘤转移的首要条件。进入组织中的肿瘤细胞首先与细胞外基质直接接触,它会受到正常组织内的细胞及细胞外基质的影响而发生转变,同时,细胞-细胞、细胞-细胞外基质的相互作用共同调节肿瘤细胞生物学行为,包括细胞增殖、表型、分泌等,因此,我们认为正常的成纤维细胞在肿瘤发生及进展过程起关键作用。成纤维细胞是细胞外基质中主要细胞。成纤维细胞不仅可以提供从细胞外微环境的刺激,还可通过旁分泌途径分泌大量的细胞因子。研究指出肿瘤相关的成纤维细胞与肿瘤发生发展密切相关,然而正常的成纤维细胞对肿瘤细胞的作用一直存在争议。正常成纤维细胞抑制永生化的前列腺上皮细胞恶性转化。而在乳腺癌中,成纤维细胞促进了导管内癌转变为浸润癌。而实验方法的不同可能是导致差异结果的一个原因。在实验中,我们通过将胃癌细胞BGC-823s与正常的成纤维细胞进行体外共同培养以模拟体内肿瘤细胞与正常成纤维细胞的相互作用,我们发现,正常成纤维细胞可将胃癌BGC-823s诱导转化为散在的短梭形细胞,该细胞生物学行为与BGC-823截然不同,包括增殖、侵袭、迁移、转移和化疗敏感性。动物实验中,我们证实该细胞成瘤能力明显减低,但转移能力却增强,尤其是淋巴转移能力,我们初步研究发现该群细胞E-钙粘素显著下调,证实该细胞具有上皮间质转化相关的特性。2.实验方法2.1正常成纤维细胞与胃癌细胞BGC-823长期共观察肿瘤细胞大体变化；2.2通过不同荧光素标记成纤维细胞及BGC-823,并进行体外及体内示踪；2.3通过细胞增殖和细胞周期实验检测BGC-823细胞增殖能力,通过迁移和划痕实验检测细胞迁移能力,通过侵袭实验和三维培养检测细胞侵袭能力,并通过药物抑制实验及细胞凋亡检测肿瘤细胞对顺铂和5-FU药物化疗敏感性；2.4通过实时荧光定量PCR,蛋白凝胶电泳及细胞免疫荧光方法观察转化后的BGC-823细胞内E-钙粘素表、波型蛋白、p-连环蛋白和N-钙粘素表达情况,并与未转化的BGC-823细胞对照；2.5将肿瘤细胞通过鼠尾静脉注射建立静脉注射模型观察两组肿瘤细胞在体内分布的差异；2.6通过皮下注射肿瘤细胞建立皮下种植模型观察肿瘤细胞成瘤能力和转移能力；2.7通过荧光示踪方法观察早期肿瘤细胞在体内的情况；2.8通过免疫组化的方法观察各个时间点淋巴结中E-钙粘素表和p-链蛋白表达情况。3.实验结果3.1正常成纤维细胞与胃癌细胞BGCs在体外多次长期共培养诱导肿瘤细胞形成散在分布的短梭形细胞TBGCs;3.2诱导后的肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力增强,对顺铂的敏感性明显降低；3.3TBGCs中E-钙粘素表达显著下降,而波型蛋白、p-连环蛋白和N-钙粘素表达升高,提示肿瘤细胞在长期高密度成纤维细胞作用下可能发生上皮间质转化；3.4静脉注射模型中,TBGCs组裸鼠早期即出现淋巴和肠道转移能力；而BGCs组裸鼠则以肺脏转移为主；3.5皮下致瘤模型中TBGCs组裸鼠基本无成瘤能力,表现为淋巴结转移能力增强；4.研究结论正常成纤维细胞可诱导胃癌细胞BGC-823s通过上皮间质转化等机制转化为新的细胞：TBGCs.这种细胞成瘤能力减弱,而侵袭及转移能力增强,并对常规化疗药物耐药。