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胚泡着床是人类和哺乳动物生殖过程中的重要环节,也是决定妊娠成功与否的关键,然而其机制尚未完全明了。在“窗口期"胚泡着床涉及胚胎与母体子宫间极其复杂而精细的多因素的协同作用。研究发现,在这一过程中各类调控因子有着特异的时空表达,它们诱发了着床过程的各个阶段,已成为胚泡着床的分子标记。
大量研究显示,胚泡着床和肿瘤转移在细胞的迁移、侵入等方面非常相似。从发生学的角度看,胚胎发育和肿瘤发生在细胞的增殖、生长和分化等方面有许多共同特点,尤其是它们都具有惊人的分裂能力及受原癌基因调控。
截断型p63(△№63)是p53基因家族成员之一,表达于子宫、胎盘、唾液腺、肾脏、前列腺、皮肤、胸腺等组织。已经肯定的是△Np63以显性失活的方式抑制依赖TAp63和p53的靶基因的转录而起到癌基因的功能,有利于肿瘤的发生发展。然而△Np63在小鼠动情周期及妊娠早期中的表达情况及其对胚胎着床的影响国内外仍无文献报道。
目的:
本课题旨在通过研究△Np63在小鼠子宫内膜表达的规律性变化及其对胚泡植入的影响,来初步探讨它在小鼠生殖中的作用。
方法:
1.收集动情周期各期和早孕2、3、4、5天小鼠子宫内膜,共8组,每组10只小鼠。①运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定△Np63mRNA的表达;②免疫组织化学SP法检测小鼠子宫内膜中△Np63蛋白的表达情况;
2.于孕4天小鼠子宫角注射抗△Np63的单克隆抗体,孕8天观察着床率,分析△Np63对小鼠胚泡着床的影响。
结果:
1.RT-PCR:动情前期△Np63mRNA表达明显;动情间期和动情期表达减弱;动情后期未检测到其表达;△Np63mRNA在早孕小鼠子宫内膜表达显著,孕5天达最高。
2.免疫组织化学:△Np63蛋白在间质细胞胞浆表达;△Np63蛋白的表达规律基本上与mRNA水平的表达规律相似。
3.于孕4天子宫角注射抗△Np63单克隆抗体,观察结果显示注射抗体2u1×200ug/ml组,胚泡着床率由对照组的75.08%降至63.86%,差异明显(p
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