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黄体的主要功能是分泌孕酮,它的退化意味着下一个发情周期的开始,因此,它在卵巢周期性调节和妊娠的维持中起着重要作用。在啮齿类动物中,黄体退化首先会发生功能性退化(孕酮合成水平明显降低),而后发生结构性退化(细胞凋亡的发生)。本论文采用苏木素-伊红染色(HE)、酶联免疫测定(ELISA)、免疫组织化学(IHC)、RT-PCR、real-time PCR、免疫印迹(Western blot)等方法,研究MAPK与立早基因(ATF3、NR4A1和NR4A2)在PGF诱导的假孕大鼠黄体退化过程中的表达模式及其可能作用,为进一步研究哺乳动物卵巢黄体退化提供试验依据。主要内容如下:1.ATF3与MAPK参与PGF诱导假孕大鼠黄体退化的作用研究为了研究ATF3与MAPK成员参与PGF诱导假孕大鼠黄体退化的作用,本试验采用PMSG/hCG联合处理构建大鼠假孕模型。在假孕第七天注射PGF,分别在0h、10 min、30 min、1h、2 h和4 h颈椎脱臼法处死大鼠。ELISA结果表明:血中孕酮水平呈时间依赖性下降。WB结果表明:在PGF处理2h,ATF3的表达量显著上升(P<0.01);而在30min,p-ERK和p-JNK表达量显著上升(P<0.01);相比之下,p-p38的表达量却没有明显变化。IHC结果表明:PGF处理后,黄体中p-ERK的染色自外向里逐渐减弱;而ATF3的染色相对均匀的分布在大、小黄体细胞的细胞核。这些结果提示PGF会诱导MAPK部分成员的磷酸化,它们的变化可能参与调控黄体退化过程中ATF3表达的升高与孕酮水平的降低。2.核受体NR4A1与NR4A2在PGF诱导的大鼠黄体退化中的定位及其表达规律通过观察核受体NR4A成员NR4A1与NR4A2在PGF诱导的大鼠黄体退化中的表达规律,推测其在大鼠黄体退化过程中的可能作用。在假孕第七天行PGF不同时间点(0 h、30 min、1 h、2 h 和 4 h)注射,采用 RT-PCR 和 real-time PCR 方法检测卵巢中NR4A1与NR4A2mRNA表达变化,IHC观察黄体中NR4A1与NR4A2的定位。结果:NR4A1蛋白主要定位在黄体细胞的细胞质中,在卵母细胞和膜细胞上也有表达,且在PGF处理后,NR4A1mRNA水平先上升而后下降,并且在30min-lh表达量最高,与生理盐水组相比差异极显著(P<0.01)。而NR4A2在黄体中呈不均匀(片状或颗粒状)分布,大部分在黄体细胞的细胞质中表达,并且在PGF处理后,NR4A2 mRNA水平的变化趋势与NR4A1保持一致,处理30 min-1 h组NR4A2mRNA水平与生理盐水组相比差异极显著(P<0.01),但NR4A2mRNA水平的变化不及NR4A1敏感。上述结果提示核受体NR4A1和NR4A2可能与PGF诱导的假孕大鼠黄体退化有密切关系。