【摘 要】
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乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B x-interacting protein,HBXIP)由1998年Melegari等首次从肝癌细胞系HepG2细胞中分离获得,由于它能够与乙肝病毒X蛋白(hepatitis B x prot
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乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B x-interacting protein,HBXIP)由1998年Melegari等首次从肝癌细胞系HepG2细胞中分离获得,由于它能够与乙肝病毒X蛋白(hepatitis B x protein,HBX)的C-末端特异结合而命名.hbxip基因在高等动物的许多组织中都有表达,尤其在骨骼肌和心肌组织中表达丰富.据此,我们推测它可能与肌肉组织的运动和收缩等重要的生理功能有关,hbxip基因在各种肌组织中基因序列以及其功能不清,值得研究.该研究根据已知的HepG2细胞的hbxip基因序列(GenBank序列号:AF029890)设计PCR引物,从胎儿心脏、骨骼肌、子宫、成人子宫、小鼠心脏、骨骼肌、子宫和SM3细胞(兔主动脉平滑肌细胞系)等不同肌组织和细胞中分别提取总RNA,克隆了8个hbxip基因的编码区序列,进行基因测序,与GenBank数据库对比分析.结果表明,来源于胎儿心脏、子宫、成人子宫的hbxip的基因序列与HepG2的hbxip的基因序列完全相同;小鼠心脏、骨骼肌和子宫的hbxip的基因序列与家鼠(GenBank序列号:AY419693)的hbxip基因序列完全相同;但是兔SM3和胎儿骨骼肌的hbxip基因序列与GenBank中报道的hbxip的基因序列部分不同(约90﹪同源性),属未报道基因.已对上述两个基因序列进行了GenBank的注册申请.将已知的HepG2和家鼠的hbxip的基因序列以及该研究获得的未见报道的两个基因序列翻译成蛋白序列后,进行蛋白质同源比较分析.结果表明,发现与HepG2相比家鼠的蛋白序列上有1个氨基酸的差异;兔SM3和HepG2的HBXIP蛋白序列完全一致,胎儿骨骼肌与HepG2的HBXIP序列相比约有90﹪的同源性.另外,应用生物信息学研究方法,对HepG2和胎儿骨骼肌来源的HBXIP蛋白序列进行二级结构的预测分析,显示了α螺旋或β折叠在蛋白序列上的分布情况.在此基础上,该文构建了pcDNA3-xip真核表达载体,应用脂质体法对培养的SM3细胞进行hbxip基因的基因转染(transfection),采用细胞Scrape Motility实验,对细胞移动能力进行了检测,发现在一定程度上hbxip基因能够增加SM3细胞的迁移能力.流式细胞仪检测结果显示,hbxip基因对平滑肌细胞SM3的细胞周期无明显影响.
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