林蛙油是雌性林蛙输卵管的干制品,其蛋白含量丰富,约占50%。本研究以冷冻的林蛙油为研究对象,用PBS提取林蛙油蛋白,并将其酶解制备林蛙油蛋白酶水解物,测定其对小鼠脾淋巴细胞与巨噬细胞的免疫调节作用。主要研究结果如下:(1)林蛙油对小鼠脾淋巴细胞具有一定的促进增殖效果。用五种不同提取剂(蒸馏水、1M NaOH、PBS、1MNaCl、80%乙醇)制备林蛙油提取物,研究其对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,结果表明五种提取物均有一定的促进作用,其中林蛙油水提物和PBS提取物促进效果较明显。用PBS为提取剂制备的林蛙油蛋白,具有更明显的促进脾淋巴细胞增殖作用。以上结果表明林蛙油蛋白中含有促进小鼠脾淋巴细胞增殖的活性物质。(2)用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶等5种蛋白酶对林蛙油蛋白进行水解,得到林蛙油蛋白酶水解物,分别称为PAH、TPH、PEH、NPH、APH。用中性红吸附和格里斯分析方法,研究林蛙油及其蛋白酶水解物对巨噬细胞功能的影响,结果表明NPH促进巨噬细胞吞噬及产生NO效果,较林蛙油蛋白及其它四种蛋白酶水解物显著。以上结果表明林蛙油蛋白经适当的水解后,其免疫调节作用更显著。(3)用MTT细胞增殖分析实验,研究NPH对小鼠巨噬细胞增殖的影响。NPH未显示明显促进作用,也未显示细胞毒性作用,该结果表明NPH对巨噬细胞功能的调节作用与细胞增殖无关。(4)NPH促进巨噬细胞分泌炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α,也促进分泌趋化因子IL-8和IFN-y,促进作用均显著,且具有浓度依赖性。NPH也促进巨噬细胞分泌IL-12,且具有浓度依赖性,但其作用并不显著。(5)用MTT细胞增殖分析实验及酶联免疫吸附实验,研究NPH对小鼠脾淋巴细胞增殖和功能的影响,结果表明不仅促进脾淋巴细胞增殖,也促进其分泌IL-2。以上研究结果表明,林蛙油蛋白具有调节免疫细胞功能作用,当其被中性蛋白酶水解后,因活性成分的释放,其免疫调节作用更显著。