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肺癌(1ung cancer)是原发性肺癌的简称,其中85%是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。2008年,全球确诊为肺癌约1.61亿人,为癌症总人数的13%。我国每年肺癌发生增长率为26.9%,若不及时采取相关措施,2025年可能达100万人,其中云南宣威市肺癌标准化死亡千分率为0.83,是全国平均水平的4.11倍。上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)指具有细胞极性、细胞间黏附的上皮细胞失去原有特性,转变成迁移和侵袭力较大的间质细胞的过程。EMT与肿瘤转移、耐药及复发之间的关系密切。参与肿瘤EMT的细胞外信号分子有Notch, Hedgehog, TGF-P(Transforming growth factor-β)、RTK (receptor tyrosine kinase)、Wnt等。目前,EMT已成为肿瘤防治研究的热点。大量研究已表明,EMT广泛存在于肺癌之中,并在转移、耐药及肺癌干细胞中起着重要作用。目前,基于天然化合物具有结构丰富、靶点多等特点,已发现诸多天然活性成分及化合物如：中药黄芩和川贝母提取液、南蛇藤乙酸乙酯提取物、蛇床子素、白藜芦醇、毛地黄黄酮等对肿瘤EMT有抑制作用。黄芩以根部入药,是唇形科多年生草本植物。肺癌在中医中属于肺积、咳嗽、咯血、胸痛等范畴,中医治疗肺癌的处方中均利用黄芩的泻肺清热之功效。黄芩对肺癌的药理作用机制包括：诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、化疗增敏作用、阻止癌细胞转移等。肺癌患者治疗失败主要原因是肿瘤耐药、转移及复发,且均有EMT参与。至今为止,关于黄芩对肺癌EMT是否有影响的研究尚未见报道。本课题拟研究黄芩总黄酮提取物对TGF-β1诱导肺癌A549细胞发生EMT的影响。首先,通过TGF-β1诱导A549细胞发生EMT,然后黄芩总黄酮提取物对其进行干预；采用MTT法、划痕实验、Transwell小室和PT-PCR实验对其进行研究；同时,研究黄芩总黄酮提取物对肺癌A549细胞因EMT而可能产生顺铂耐药、迁移和侵袭的影响。本研究结果：黄芩总黄酮提取物作用于TGF-p1诱导组和未诱导组中的肺癌A549细胞72h后的IC50值分别是48.790ug/ml和43.178ug/ml(P=0.0393),在黄芩总黄酮提取物浓度为50ug/mL时,两组细胞增殖抑制率存在显著差异,但在其他浓度均无显著差异(P>0.05)；顺铂对TGF-p1未诱导组、诱导组及诱导组联合50ug/ml黄芩总黄酮提取物的肺癌A549细胞作用48h的IC50值分别是2.993ug/ml、3.314ug/ml 和 2.434ug/ml (P=0.0025),联合诱导组相对于未诱导组和诱导组的顺铂IC50值具有显著性差异(P<0.05),且分别降低18.68%和26.55%;虽然诱导组和未诱导组之间的IC50并未存在显著差异(P>0.05),但不管肺癌A549细胞是否发生EMT,黄芩总黄酮提取物在顺铂浓度2～4ug/ml内都增加其对顺铂的敏感性,奇怪的是在0～1ug/ml 和 6～8ug/ml内起着相反的作用。不论TGF-β1诱导组还是未诱导组的肺癌A549细胞,黄芩总黄酮提取物对其均有抑制细胞迁移、侵袭的作用,呈浓度依赖性,且两组的细胞迁移和侵袭抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。黄芩总黄酮提取物可逆转TGF-β1诱导下调上皮细胞标记蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和上调间质细胞标记蛋白波形蛋白(Vimentin) mRNA表达,呈浓度依赖性。综上所述,黄芩总黄酮提取物对TGF-β1诱导肺癌549细胞发生EMT有一定的抑制作用,这可能与上调E-cadherin和下调Vimentin mRNA表达有关。此外,不管肺癌549细胞是否发生EMT,黄芩总黄酮提取物均抑制其细胞迁移、侵袭,并呈浓度依赖性,且在顺铂浓度2～4ug/ml内增加其对顺铂敏感性。病理TNM(tumor node metastasis)分类、年龄、性别及肿瘤类型均是影响非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者预后的重要因素,上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)参与肿瘤形成、侵袭、转移、复发及耐药过程,其关键生物调控因子可为临床预后提供重要的生物标记分子。EMT过程中上皮细胞标记蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)低表达不利于NSCLC患者总生存期(overall survival, OS),且与肿瘤分化、淋巴转移、血管侵袭及TNM分期有关。波形蛋白(Vimentin)是间质细胞标记蛋白,近年随着关于Vimentin表达对NSCLC患者预后影响的研究逐渐增多,其研究结果仍存在一定差异。至今为止,国内外尚无关于Vimentin表达对NSCLC患者预后的影响进行Meta分析。因此,本研究采用Cochrane系统评价方法,Meta分析免疫组化检测NSCLC患者肿瘤组织Vimentin表达水平对NSCLC患者OS和无病生存期(disease-free survival, DFS)的影响,以期为其临床应用提供相关证据。从CNKI、Wang Fang、 VIP、CMB、EMBASE、MEDLINE、PUBMED、The Cochrane library、The clinical trail、Elsevier SD外文期刊数据库、SCI科学引文索引数据库中查找Vimentin表达与NSCLC患者预后相关的前瞻性队列研究,文献检索时限均从建库至2015年2月2日。由两位研究者对检索踢重后得到的研究根据纳入和排除标准,独立筛选文献、提取材料和评估质量,并交叉核查后,采用Stata12.0软件对结果进行Meta分析。本研究共纳入9篇文献,有9项研究(n=1 302)。Meta分析Vimentin表达对N SCLC患者OS和DFS影响的合并风险比(hazard ratio, HR)分别为HR=2.04,95%CI(1.57,2.66), P<0.001 和 HR=1.56,95%CI(1.20-2.04), P=0.001;采用Begg、Egger检验分析OS时纳入9个研究的结果表明：无统计学发表偏倚；且敏感性分析结果表明：本次分析结果较稳定。总之,Vimentin高表达是NSCLC患者OS和DFS的不利风险因素,但由于本次meeta分析纳入的研究数量较少,其结论有待大样本量的研究进行证实。