论文部分内容阅读
阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是严重威胁人类生命健康的重要疾病之一。目前,治疗AD最有效的策略是使用乙酰胆碱酯酶抑制剂（Acetylcholinesterase inhibitor,ACh EI）。近年来,国内外学者从天然植物体内分离得到许多生物碱类结构类型的ACh EI,且已经上市用于治疗AD的ACh EI几乎全部是生物碱,因此,从植物生物碱提取物中开展ACh E（Acetylcholinesterase）活性成分研究,对进一步开发治疗AD的新药有重要意义。但植物生物碱提取物的物质体系极其复杂,传统的方法很难对其实现高效的分离分析。本文以新疆特色植物骆驼蓬、小花棘豆、苦马豆和苦豆子为植物材料对其进行了ACh E活性研究,并成功将本实验室建立的液相色谱-离子迁移谱（HPLC-IMS）二维联用方法首次应用于生物碱类化合物的高效分离分析中,旨在从天然植物生物碱中筛选出新的ACh EI和为生物碱的分离分析提供一种新的方法。主要内容和结果如下:1.骆驼蓬子生物碱ACh E抑制活性及化学成分分析研究。对骆驼蓬子总生物碱提取物,氯仿相,乙酸乙酯相,正丁醇相,生物碱沉淀相以及水相采用改良的Ellman比色法进行了ACh E活性研究,发现除水相外,骆驼蓬子的其他各相生物碱均具有较高的ACh E抑制活性,其IC50值依次为0.049mg/m L、0.035mg/m L、0.075 mg/m L、0.099 mg/m L和0.104 mg/m L,并从氯仿相中分离得到了3个单体化合物,经1H NMR、13C NMR鉴定为鸭嘴花酮碱（vasicinone）,鸭嘴花碱（peganine,vasicine）和骆驼蓬碱（harmaline）。采用X-Bridge HILIC色谱柱与HPLC-IMS体系相结合,并在多路复用相关离子迁移谱（CIMS）模式下,对骆驼蓬子的四相萃取物进行HPLC-IMS二维联用分析,从氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相,生物碱沉淀相中分别检测到了33、18、24和17个化合物,并借助质谱分别鉴定出来了11、10、9和6个化合物。2.小花棘豆和苦马豆生物碱ACh E抑制活性及化学成分分析研究。对小花棘豆和苦马豆2种植物的共25相萃取物进行了ACh E抑制活性研究,实验结果显示,小花棘豆根、叶以及苦马豆叶的氯仿相萃取物具有较高的ACh E抑制活性,其IC50值分别为0.67mg/m L、1.69mg/m L和0.17mg/m L。另外,动力学研究表明,小花棘豆和苦马豆叶氯仿相对ACh E的抑制类型均为可逆的混合型抑制。采用PCP RP C18色谱柱与HPLC-IMS体系相结合,并在多路复用相关离子迁移谱（CIMS）模式下,对小花棘豆和苦马豆叶氯仿相进行二维联用分析,分别检测到了36和26个化合物。3.苦豆子ACh E抑制活性及化学成分分析研究。对苦豆子的根、茎、叶、种子、种皮五个不同部位提取的总生物碱和五种生物碱标准品进行了ACh E抑制活性研究,实验结果显示,苦豆子种子具有较高的ACh E抑制活性,其IC50值为0.716 mg/m L。且标准品槐果碱的活性最高,IC50值为0.17 mg/m L。另外,动力学研究表明,苦豆子种子中的总生物碱对ACh E的抑制类型为可逆的混合型抑制。采用PCP RP C18色谱柱与HPLC-IMS体系相结合,并在多路复用相关离子迁移谱（CIMS）模式下,对苦豆子根、茎、叶、种皮、种子的总生物碱进行分析,分别检测到了47、25、46、43和34种化合物。测定了金雀花碱和苦豆碱两种生物碱在各部位的含量,金雀花碱在苦豆子根、茎、叶、种皮和种子总生物碱的含量分别为1.05%、2.01%、0.44%、0.72%和2.33%,苦豆碱在苦豆子茎、叶以及种皮总生物碱中的含量分别为0.23%,2.14%和0.05%。