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核心蛋白聚糖(decorin，DCN)为蛋白聚糖(PG)的一种，属富含亮氨酸的小分子蛋白聚糖家族的成员，在调节细胞粘附、迁徙、增殖、胶原纤维形成及对TGF-β活性调节中起重要作用。人DCN核心蛋白基因外显子序列长1080bp，编码395个氨基酸。 目的 建立并利用巴氏毕赤酵母(Pichia Pastoris)真核表达系统表达人DCN核心蛋白。 方法 ①利用人DCN核心蛋白的特异引物，通过RT-PCR扩增人DCN核心蛋白基因的cDNA全长，将扩增的人DCN核心蛋白基因与载体pPic9k重组，并转入DH5α进行测序鉴定；②将序列正确的重组体大量扩增后酶切线性化，通过醋酸锂法转入酵母宿主HIS~-／GS115细胞中，然后在含不同浓度G418的YPD平板上筛选阳性克隆；③用含1％甲醇的BMMY培养基诱导表达该蛋白；④在人肝母细胞瘤细胞(HepG2)培养液中加入不同浓度的表达产物，作用一定时间后，观察表达产物对HepG2细胞生长的影响。 结果 ①扩增出的人DCN核心蛋白基因片断测序的结果与GeneBank中的人DCN核心蛋白基因序列对比，序列完全一致，无突变。②构建了真核表达载体pPic9k-DCN，并将酶切线性化的重组载体转入酵母菌HIS~-／GS115后，筛选出了抗高浓度(4mg／ml)G418的阳性克隆，并用PCR法进行了鉴定。③用表达产物对HepG2细胞进行干预的结果表明，表达产物对HepG2细胞增生有抑制作用，并表现出浓度和时间依赖性关系，各剂量组间均有显著性差异(P＜0.05)，且随着作用时间延长生长抑制作用也增强(P＜0.05)。HE染色可见细胞突起回缩，核固缩致密，染色加深，凋亡小体形成，大量肿瘤细胞凋亡。 结论 建立了Pichia Pastoris真核表达系统，表达了人DCN核心蛋白，若进一步优化条件，可纯化出人DCN核心蛋白，为大量表达人DCN核心蛋白奠定了基础，也为DCN生物学活性的研究及肿瘤临床诊治提供必要条件。