本论文研究了一株对虾肠道共生菌——坚强芽孢杆菌PC465（Bacillusfirmus）在凡纳滨对虾养殖中的应用技术，并对其在促进对虾生长、提高存活率、增强免疫能力等方面的作用效果进行了评价。研究主要分为四部分：第一部分：坚强芽孢杆菌PC465最适培养条件的优化和规模化发酵。碳源、氮源、无机盐等多个方面优化了该菌株的培养基成分，确定了包含初始pH、温度，以及接种量等的最适培养条件。优化后的培养基：蛋白胨5g、酵母提取物1g、FeSO40.05g、自来水1L；最佳培养条件：初始pH=6、温度=28³7℃，接种量=4%总发酵液体积。在确定培养基成分和培养的基础上，对PC465进行了规模发酵。利用最佳优化培养基在最佳简单化培养条件下利用5L和50L容量发酵罐进行14小时的规模化发酵，发酵后的菌悬液用4℃，7,500×g进行离心后得到菌泥，将一部分菌泥收集置于-80℃进行存放，一部分进行冷冻干燥制成干粉。收获的菌泥可与饲料原料混合制成含有一定添加浓度的含有PC465芽孢的颗粒免疫饲料，也可与鱼油和褐藻酸钠混合液混合后包裹在商品饲料表面制成免疫饲料。第二部分：坚强芽孢杆菌PC465在凡纳滨对虾养殖实验中的应用及效果评价。将第一部分得到的含有一定添加浓度的PC465的饲料应用到3m3养殖水体（3m²×1m）的凡纳滨对虾养殖实验中，研究了添加浓度、投喂频率等应用技术参数对对虾生长和成活率的影响，并分析了对虾血淋巴中免疫相关酶ACP和SOD活性以及类淋巴组织中STAT基因表达情况，用于综合评价PC465的作用效果。在整个试验中测量试验前后凡纳滨对虾的湿重，每个周进行凡纳滨对虾的血淋巴的抽取并分别用于ACP和SOD酶活的测定，每个周进行凡纳滨对虾类淋巴的摘取，并进行Total RNA提取、反转录及相对real-time PCR的测定。结果表明，在35d的实验期间内，饲料中坚强芽孢杆菌PC465添加量为106、108和1010CFU/g均能显著提高凡纳滨对虾的生长率（P<0.05），1010CFU/g的添加量组的对虾在整个试验期的促生长效果和STAT基因表达量略高于10⁶和10⁸CFU/g添加量组；但综合评估生长促进效果和芽孢杆菌添加量，则10⁶CFU/g添加量的比增效率达5.19×10^-7CFU，远远高于其他组；在饲料中用107CFU/g的坚强芽孢杆菌PC465添加量，在35d的实验期间内，采取间隔“1+1”、间隔“4+3”和连续不断的方式投喂凡纳滨对虾，均能显著提高对虾的生长率和对虾淋巴器官中STAT基因的表达水平（P<0.05），且以连续投喂组的效果最好。第三部分：坚强芽孢杆菌PC465在凡纳滨对虾工厂化养殖中的应用及效果评价。将第一部分得到的含有一定添加浓度的PC465的饲料应用到30m3养殖水体（30m²×1m）的凡纳滨对虾工厂化养殖生产中，期间定期采样分析凡纳滨对虾生长率，存活率，肠道消化酶活性，肠道内表面结构，用于评价PC465的作用效果。结果显示：在30d的实验期间内，饲料中坚强芽孢杆菌PC465添加量为107和109CFU/g均能显著提高凡纳滨对虾的生长率和SGR以及存活率（P<0.05），添加饲料中坚强芽孢杆菌PC465添加量为107和109CFU/g均能显著提高凡纳滨对虾能够显著提高对虾肠道的淀粉酶和蛋白酶活性（P<0.05）；并且在连续投喂第15天能够显著促进对虾肠道脂肪酶的活性（P<0.05）；添加添加饲料中坚强芽孢杆菌PC465添加量为107和109CFU/g能够显著改变对虾肠道内表面的结构，并且109CFU/g的投喂浓度显著地改变期内表面结构。第四部分：坚强芽孢杆菌PC465添加到饲料中对凡纳滨对虾血淋巴免疫相关因子表达水平的影响。将PC465添加到饲料中投喂对虾，在实验开始后的0h，6h，18h，48h和168h取样，抽取血淋巴注入RNAlater中4℃过夜后置于-80℃保存。提取血淋的Total RNA后进行反转录和real-time PCR分析proPO，SP，Crustin，Penaeidin，lysozyme和Dicer-1的免疫相关基因的表达水平。结果显示了饲料中添加PC465浓度为10⁷和10⁹CFU/g能够有效地提高凡纳滨对虾血淋巴中溶菌酶，crustin，Pen-3a和lvDcr-1相关免疫基因的表达（P<0.05），并且10⁷浓度能够显著提高SP的表达水平（P<0.05），证明PC465能够显著的促进凡纳滨对虾免疫力。