欧李是我国特有的灌木果树,果实富含果酸钙,又称为“钙果”。抗逆性较强,根系强大,有较强的吸收水分和吸收营养物质的能力,可做防风固沙树种。欧李果实颜色鲜艳,味道独特,营养丰富,具有很高的经济价值和研究价值。探究欧李色泽和风味的代谢为今后开展果实色泽育种和品质改良奠定基础。与果实色泽和风味有关系的类胡萝卜素裂解氧化酶,在CCDs基因的催化裂解下,生成脱辅基类胡萝卜素,脱辅基类胡萝卜素有很多生物学功能,CCD1和CCD4裂解生成的脱辅基类胡萝卜素主要参与花与果实的色泽和风味的形成。本课题组前期研究表明,欧李CCD1基因能够将番茄红素和β-胡萝卜素裂解生成6-甲基-5-庚烯-2酮和β-紫罗兰酮。本研究构建了植物表达载体,利用农杆菌介导法将欧李CCD1基因导入番茄植株中。诱导目的基因表达,通过番茄果实颜色色差分析和番茄红素的测定验证欧李CCD1基因的功能。主要研究内容如下:1.根据欧李CCD1基因序列和植物表达载体PBI121的序列设计引物,扩增欧李CCD1 cDNA的完整序列。PCR扩增后将产物回收得到克隆载体PMD18T-CCD1,提取其质粒与PBI121质粒载体连接,构建植物表达载体PBI121-CCD1。采用冻融法将构建好的植物表达载体导入农杆菌EHA105中。2.以番茄再生体系为基础,用含有目的基因的农杆菌菌液侵染Micro-Tom番茄的子叶。在遗传转化过程中,有很多因素影响转化率,使转化率降低。本试验通过正交设计得到最优化的遗传转化体系:侵染浓度OD₆₀₀=0.5,侵染时间是10min,共培养时间为1d,抗生素浓度是300mg/L。最终不定芽分化培养基为:MS+ZT 2 mg/L+Timentin 300mg/L+kan 100 mg/L pH值为5.8。最后进行生根培养及炼苗得到转基因番茄植株。3.采用CTAB法将对照植株和转基因植株的DNA提取出来。以番茄DNA为模板,进行PCR验证。根据凝胶电泳结果显示,初步可以表明欧李CCD1基因转入番茄基因组中。通过番茄果实颜色色差分析和番茄红素含量的测定,可以推测出欧李CCD1基因编码的蛋白质对番茄红素有降解作用。