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背景：越来越多的证据表明，肾素-血管紧张素-醛固酮系统（Rennin angiotensin aldosterone system，RAS）过度活跃在多种心血管疾病的发生、发展中发挥重要作用。目前在临床上广为应用的血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）和血管紧张素Ⅲ受体1（angiotensin Ⅱ receptor 1，AT1）拮抗剂能有效地抑制RAS，降低和控制血压，并且对靶器官有良好的保护作用。但它们也有一些不足之处，如药物的有效作用时间相对较短（≤24h），特异性相对较差，长期服用有一定的副作用，常因病人长期服药的依从性差而影响降压效应，尤其是那些无症状患者。据报道，到目前为止也只有20％～35％的病人血压得到了真正的控制。随着近年来分子生物学理论与技术的发展，特别是在靶基因界定和载体构建方面取得的重大进展，高血压的基因治疗成为新的探索。反义寡核苷酸（antisense oligonuleotides，AS-ODNs）技术是目前基因治疗的常用方法之一，它操作简便、快捷、经济，风险／收益比低，因此在心血管疾病的基因治疗中比其他方法更具实用性。此前多项以AT1为靶基因的AS-ODNs，在多种高血压动物模型中显示了良好的降压效果。但这些研究多侧重于AT1基因被封闭后实验动物血流动力学的改善情况，高血压组织重构的相关研究较少。由于并非所有的细胞都可被寡核苷酸成功、高效转染，加之迄今为止尚未见AS-ODNs转染心肌细胞及其动力学的相关报道，因此尚不能肯定在活体研究中，AS-ODNs的一些心肌保护效应是由于其直接作用于心肌细胞的结果，而并非是作用于心肌成纤维细胞、内皮细胞，或是由于血流动力学的改善而产生的间接性结果。 目的：针对这种情况，本研究以体外培养的乳鼠心肌细胞为实验模型，通过观察转染过程中AT1-AS-ODNs在心肌细胞内的时相分布特点，转染效率及细胞毒效应，探讨AT1-AS-ODNs转染心肌细胞的可能性；同时检测AT1-AS-ODNs转染后，对AT1基因表达的抑制效应；并探讨在缺乏或存在外源性过度生长刺激的条件下，封闭AT1表达对心肌细胞生理、病理生长的影响。 方法：本研究应用胰蛋白酶和胶原酶联合分段消化法分离心肌细胞，采取差速贴壁的方法对心肌细胞进行纯化，原代培养，建立细胞模型。免疫细胞化学技术进行α一Sarcomeric actin染色，鉴定心肌细胞纯度。以脂质体为传递体系，携带AT，一AS一ODNS转染心肌细胞。显微荧光技术监测ATI一AS一ODNS在心肌细胞内的时相分布及转染效率。MTT法结合倒置相差显微镜分析转染复合物对心肌细胞的细胞毒作用;蛋白印迹技术检测ATI一AS一ODNs进入心肌细胞后对靶基因的抑制效应。流式细胞仪检测心肌细胞周期分布、细胞内DNA合成及凋亡百分率;免疫沉淀技术检测细胞内p46JNK、P54则K活性;免疫细胞化学检测核转录因子c一Jun蛋白表达水平;放免法检测细胞内心钠素（忽rial natriuretic faetor，ANP）合成、分泌情况。 结果: 第一部分免疫细胞化学染色示90%以上的培养细胞Q一Sarcomeric actin抗原染色呈阳性，表明细胞模型构建成功，心肌细胞纯度达90%以上。显微荧光技术证实，当单独转染心肌细胞时，AT，一AS一ODNs（裸DNA）于转染30min后开始进入细胞，转染阳性细胞数不及23%;6Omin后转染效率达峰值为30%，此时转染阳性细胞核内有点状荧光物质积聚;120min后，细胞内的荧光强度降低;至24Omin后，基本消失。在脂质体的介导下，ATI·AS一ODNs于3Omin开始进入细胞，在胞浆内呈点状分布;60一120min迅速积聚于细胞核，转染效率达60%，此后平缓降低;24Omin时荧光AS一ODNs仍稳定存在于细胞核与细胞浆内，转染效率仍维持于50%左右。MTT实验证实，无论是AT】一AS一ODNS单独转染，还是脂质体包裹ATI一AS一ODNS共同作用于心肌细胞，各时间点OD值与对照组相比均无显著差异。倒置显微镜下，也未见心肌细胞发生明显的贴壁、伸展状态改变或细胞脱落、悬浮增加的现象。 第二部分为避免非特异性抑制效应，本研究应用的AS一ODNs的浓度相对较低，仅为ZO0nlnol/L，但其抑制效应显著。AT，一AS一ODNs转染24h后，心肌细胞内AT，蛋白表达显著降低，为对照组的393%，而AT，一S一ODNs无效。Angn（10一6 mol/L）刺激24h，负性调节AT，基因表达，替米沙坦（10一5 mol/L）干预对此有明显抑制作用。与替米沙坦不同，AT，一AS一ODNs预处理并没有逆转Angll诱导的AT;蛋白表达下调，相反Angll刺激经ATI一AS一ODNs预处理后的心肌细胞，ATI表达水平进一步降低。 第三部分ATI一AS一ODNs转染24h后，心肌细胞贴壁伸展状态良好，未见明显细胞脱落、悬浮现象;转染24h内各时间点细胞MTT产物的OD值及细胞搏动频率与对照组相比均无显著性差异。对照组心肌细胞内p46则K、p54JNK的基础活性较低，但存在一定量的c一Jun蛋白表达，细胞凋亡百分率为1.09%。AT、一AS一ODNS转染对细胞内则K活性、。一Jun蛋白表达量及凋亡均无显著影响。增殖周期及DNA含量分析证实，AT，一AS一ODNS转染后心肌细胞周期分布及各期DNA含量与对照组相比均无显著差巳岁十。 第四部分灿911（10一6mol几）刺激心肌细胞3omin后，p46JNK、ps4州K被显著激活，分别为对照组的2.5和3.1倍;刺激