灰毛豆内生真菌的分离及其活性菌株TPL25次生代谢产物的研究

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hengheng5251984
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灰毛豆是一种广布于热带、亚热带地区的半灌木,其一直是传统的草药配方的重要组成原料,同时也是杀虫成分鱼藤酮的重要来源植物。本实验室前期已围绕灰毛豆提取物杀虫活性筛选及植物不同部位根、茎、叶、种子的次生代谢产物进行了系统的研究。而植物内生真菌通常能参与并影响寄主植物次生代谢产物种类或含量,少数内生真菌甚至能生产与寄主植物相同或类似的次生代谢物。截止目前,国内外尚无灰毛豆内生真菌的研究报道。因此,本论文以灰毛豆内生真菌为研究对象,主要阐明其内生真菌的多样性、生物活性及次生代谢产物,为杀虫植物灰毛豆的深入开发和利用提供基础。具体研究结果如下:1、对灰毛豆各组织的内生真菌进行分离鉴定,从灰毛豆根、茎、叶中分离得到61株内生真菌,经形态学和分子生物学鉴定,这些菌株分属于1个门,3个纲,7个目。其中59株内生真菌鉴定到属。2、以6种植物病原真菌为指示菌,通过初筛和复筛,获得高效活性菌株TPL25,其发酵液对油菜菌核病菌、烟草黑胫病菌和黄瓜疫霉病菌的抑菌率都达到了80%以上。通过形态学和分子生物学等鉴定方法,确定菌株TPL25为灰黄青霉(Penicillium griseofulvum)。3、菌株TPL25菌丝甲醇提取物,菌液乙酸乙酯提取物(4Omg/m L)对油菜菌核病菌显示出明显的抑制作用。菌株TPL25粗提物在处理浓度为50 mg/mL时,处理24h后,对烟蚜表现出毒杀活性,其中菌液乙酸乙酯提取物对烟蚜毒杀效果最为显著,其对烟蚜的毒力回归方程为Y=1.5446X+2.5788 (R 2= 0.9998),LC50值为369 mg/mL。在50mg/mL浓度处理48h后,TPL25粗提物对小菜蛾幼虫显示出拒食活性,其中菌液乙酸乙酯萃取物对其的非选择性拒食率高达98.1%。4、从菌株TPL25中分离鉴定了7个化合物,它们分别为己六醇(1)、油酸-α-单甘油酯(2)、葡萄糖甲苷(3)、尿嘧啶核苷(4)、腺嘌呤核苷酸(5)、邻苯二甲酸二异丁基酯(6)、2’,3’-dihydrosorbicillin (7)。其中化合物6对油菜菌核病菌有一定的抑制活性,化合物1和化合物7对烟蚜有一定的毒杀活性。
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