药物敏感基因能将无毒的前体药物（prodrug）转化为有毒的药物而杀伤细胞，故又称“自杀基因”。药物敏感基因治疗还具有独特的近、远距离旁观者效应，因而可能更适合于一些难治的肿瘤如胰腺癌的基因治疗。由于药敏基因如果被导入非肿瘤细胞可导致非特异性毒性作用，故实现其在肿瘤细胞中的特异性表达具有重要意义。本研究的目的是：（1）观察单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶（HSV-TK），大肠杆菌胞嘧啶脱氨基酶（CD），人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶（TP）三种药物敏感基因对胰腺癌的基因治疗作用以及旁观者效应的机制；（2）通过对HSV-TK启动子区域进行改造，构建由Myc-Max蛋白二聚体作用序列CACGTG与HSV-TK启动子部分区域组成的嵌合结构启动子，观察其在c-myc过表达细胞中的特异启动活性；（3）观察由嵌合启动子启动的HSV-TK基因对胰腺癌基因治疗的靶向性。 本研究的主要工作和结果： 一．单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶／丙氧鸟苷，大肠杆菌胞嘧啶脱氨基酶／5-氟胞嘧啶以及人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶／5′-脱氧-5-氟尿嘧啶核苷三个药物敏感系统对胰腺癌的实验性基因治疗作用。 1．利用DNA重组技术，分别构建表达HSV-TK，CD，TP药物敏感基因的逆转录病毒载体，转染人胰腺癌PC-2细胞，经G418筛选得到稳定的转化细胞系，分别命名为PC-2／LXTK，PC-2／LXCD。PC-2／LXTP。对转化细胞系采用PCR，原位杂交，Southern blot和Northern blot杂交及表达酶活性分析证实有稳定的外源基因的整合及表达。细胞倍增时间计算及³H-TdR掺入率检测均未发现导入基因对转化细胞生物学行为的影响。 2 对表达HSV-TK基因细胞PC-2／LXTK进行丙氧鸟苷（GCV）的体内外药物敏感实验发现：转化细胞对GCV的敏感度明显增加，克隆形成抑制率上升达80％，IC₅₀值下降558倍；旁观者效应实验表明，只含有10％的转化细胞时，GCV即可对混合细胞（不同比例转化和未转化细胞的混合）产生明显的杀伤作用，抑制率达39％，但单纯用含GCV的PC-2/LXTK细胞上清作用PC-2细胞时无旁观者效应，细胞密度降低或盐酸异博定亦可影响该效应；体内实验结果显示PC-2/LXTK细胞裸鼠移植瘤在GCV作用下停止生长并逐渐缩小。