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目的:本实验旨在研究补肾健脾活血法(固本活血壮骨颗粒)对SD大鼠乳鼠成骨细胞骨保护素(OPG)和破骨细胞分化因子(RANKL)的基因表达的影响,以及补肾健脾活血法(固本活血壮骨颗粒)对成骨细胞内钙离子浓度的影响,并与铁剂作出对照,从而说明补肾健脾活血法对骨质疏松症具有较为良好的防治作用。 方法:采用改良的胰蛋白酶和I型胶原酶联合的二次酶消化法对SD大鼠乳鼠成骨细胞进行原代培养、扩增,成骨细胞纯化用差速贴壁法进行;制备固本活血壮骨颗粒(大、中、小剂量)含药血清、仙灵骨葆含药血清、戊酸雌二醇含药血清以及对照组(生理盐水组)含药血清,含药血清干预成骨细胞后提取总RNA,反转录,进行RT-PCR实验;制备固本活血壮骨颗粒(大、中、小剂量)含药血清,含药血清及去铁胺(DFO)、枸橼酸铁铵(FAC)干预成骨细胞,分组为:生理盐水组、DFO、FAC、固本活血壮骨颗粒大剂量、中剂量、小剂量、大剂量+DFO、中剂量+DFO、小剂量+DFO、大剂量+FAC、中剂量+FAC、小剂量+FAC组,24h后荧光染色,拍照,分析荧光强度。 结果:与生理盐水组相比,固本活血壮骨颗粒大剂量、中剂量组骨保护素OPG mRNA的基因表达明显升高,破骨细胞分化因子RANKL的基因表达降低,p<0.05,差异有统计学意义。与生理盐水组相比,固本活血壮骨颗粒大剂量、中剂量组可明显升高成骨细胞内钙离子浓度,绿色荧光强度增强,p<0.05,有统计学意义。 结论:补肾健脾活血法(固本活血壮骨颗粒)能增强成骨细胞增殖,抑制破骨细胞活性,增加成骨细胞内钙离子浓度,增强骨骼硬度,从而可有效防治骨质疏松症的发生发展。