【摘 要】
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目的:检测真核细胞翻译起始因子5A2（eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2）在肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达,并分析其与肝细胞癌患者临床病理特征和生存预后的关系;检测肝癌细胞系中EIF5A2的表达及其对细胞增殖能力的影响,初步探讨EIF5A2对肝细胞癌发生、发展的意义。方法:采用实时荧光
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目的:检测真核细胞翻译起始因子5A2（eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2）在肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达,并分析其与肝细胞癌患者临床病理特征和生存预后的关系;检测肝癌细胞系中EIF5A2的表达及其对细胞增殖能力的影响,初步探讨EIF5A2对肝细胞癌发生、发展的意义。方法:采用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）和Western blot法分别检测EIF5A2在12例新鲜肝细胞癌及相应癌旁非瘤组织（距肿瘤边缘>5 cm）中mRNA、蛋白水平的表达;免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）检测284例肝细胞癌及相应癌旁非瘤组织中EIF5A2的表达水平,并分析其与患者临床病理参数及预后的关系;Western blot检测HCCLM3、Huh7细胞中EIF5A2的表达,瞬时转染过表达质粒和小干扰RNA（si RNA）至上述2株肝癌细胞中,采用MTT、平板克隆形成实验检测EIF5A2对肝癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测EIF5A2对细胞周期进程的影响,Western blot检测转染EIF5A2后cyclin D1、cyclin E1、cyclin A、p RB、pp RB、E2F1的表达变化。结果:新鲜HCC组织中EIF5A2 mRNA和蛋白质的相对表达水平均高于相应癌旁非瘤组织,差异具有统计学意义（t=5.305,P=0.0003;t=10.120,P<0.001）;284例HCC组织中EIF5A2的相对表达水平高于相应癌旁非瘤组织（z=-12.186,P<0.001）。EIF5A2的表达与HCC患者的肿瘤大小（X2=16.280,P<0.001）、肿瘤多发性（X2=5.665,P=0.017）、分化程度（X2=5.523,P=0.019）和TNM分期（X2=4.663,P=0.031）有关;EIF5A2高表达患者术后三年、五年总体生存期（Overall survival,OS）与无病生存期（Disease-free survival,DFS）较低表达者更短（均P<0.001）;Cox比例风险回归模型分析表明,影响HCC患者三年OS和DFS的独立预后因素有:肿瘤大小（P=0.021,P=0.035）、肿瘤多发性（P=0.004,P=0.003）和EIF5A2的表达水平（P=0.005,P=0.007）,影响HCC患者五年OS和DFS的独立预后因素有:肿瘤大小（P=0.04,P=0.007）和EIF5A2的表达水平（均P<0.001）;MTT、平板克隆形成实验结果显示,过表达EIF5A2可显著增强肝癌细胞的增殖能力（P<0.05）,而沉默EIF5A2后,肝癌细胞的增殖能力明显减弱（P<0.05）;流式细胞术结果显示,过表达EIF5A2后G1期细胞比例降低,S期细胞比例增加（P<0.05）,而沉默EIF5A2增加G1期细胞比例,降低S期细胞比例（P<0.05）;在HCCLM3、Huh7细胞中,过表达EIF5A2可上调cyclin D1、cyclin E1、pp RB、E2F1的表达（P<0.05）,沉默EIF5A2可抑制cyclin D1、cyclin E1、pp RB、E2F1的表达（P<0.05）,但EIF5A2对cyclin A、p RB的表达无明显影响（P>0.05）。结论:EIF5A2的高表达可能与肝细胞癌的发生发展过程有关,EIF5A2高表达是预后不良的独立影响因素,可作为判断HCC患者预后的潜在分子标记物;EIF5A2可能通过pp RB/E2F1信号通路调控细胞G1/S期转换影响肝癌细胞的增殖能力。
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