【摘 要】
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转录因子HY5(ELONGATED HYPOCOTYL5)是光调控植物发育的分子开关,是光形态建成的正调控因子,在光诱导的基因表达中调控着植物基因组中上千基因的表达。HY5蛋白在植物激素的信号传递过程中和光形态建成中都有重要作用,它整合了光信号传递和植物激素的信号传递。本研究以森林草莓为试材,通过PCR技术从森林草莓中分离克隆出Fv HY5基因并分析其表达特性。并通过过表达技术分析了Fv HY5基
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转录因子HY5(ELONGATED HYPOCOTYL5)是光调控植物发育的分子开关,是光形态建成的正调控因子,在光诱导的基因表达中调控着植物基因组中上千基因的表达。HY5蛋白在植物激素的信号传递过程中和光形态建成中都有重要作用,它整合了光信号传递和植物激素的信号传递。本研究以森林草莓为试材,通过PCR技术从森林草莓中分离克隆出Fv HY5基因并分析其表达特性。并通过过表达技术分析了Fv HY5基因功能。主要结果如下:1.从森林草莓中分离克隆出Fv HY5基因,Fv HY5基因的CDS碱基序列共有501 bp,所编码磷转运蛋白共含有166个氨基酸。对Fv HY5蛋白进行进化树分析,结果显示Fv HY5与甜樱桃、桃、梨和苹果的HY5蛋白同源性较近,与枣、葡萄、柚子、拟南芥的HY5蛋白同源性较远。2.克隆出约1.3kb的Fv HY5基因启动子区域,序列分析表明Fv HY5基因启动子中存在CAAT、TATA、光响应元件、激素响应元件、逆境胁迫响应元件等多种顺式作用元件。3.利用q RT-PCR技术分析验证了Fv HY5基因表达特性。Fv HY5具有组织器官表达特异性,在花和果实中表达量高,而在幼叶、老叶、根中表达量低。4.构建了Fv HY5基因的的过表达载体,并通过农杆菌介导的方法对‘Rugen’进行遗传转化,获得了Fv HY5基因过表达转基因株系三个,经过q RT-PCR技术分析鉴定了这三个转基因株系的Fv HY5基因的表达量为对照的21-23倍。对Fv HY5基因过表达的转基因草莓植株的叶片叶绿素含量和花青素的含量进行测定发现均有差异,但在不同时期差异大小不一致,在成熟叶和老叶中叶绿素的含量是对照的1.4-1.5倍。而对叶柄的花青素含量进行测定发现对照的植株叶柄中花青素含量高要于转基因植株7-8倍。并进行磷含量测定,发现在组培苗中,转基因植株叶片的磷含量要低于对照。在进行性状调查时发现转基因植株的高度变矮,冠径变小,可溶性固形物含量降低。
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