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前言 细胞周期是细胞生命活动的基本过程，由细胞周期素(cyclin)依次激活相应的细胞周期蛋白依赖性激酶CDK(cyclin-dependent-kinase)所推动。肿瘤的发生与细胞周期的失调密切相关，细胞周期的失控，使细胞获得以增殖过多、凋亡过少为主要形式的失控性生长特征，导致肿瘤的形成。研究表明，细胞周期不同时相存在关键的调控点，最重要的是G1和S期之间的调控点。通过该点后，细胞的分裂、DNA修复等事件基本是一个细胞内部自我调节的过程，即进入自主分裂程序。肿瘤细胞的主要特征是失控性生长，因此对G1-S调控点的研究就更为重要。在G1-S调控点发挥重要作用的是p16-cyclinD1-Rb通路各组分，cyclinD1与CDK4／6集合为激酶复合物，使Rb蛋白(视网膜母细胞瘤蛋白)磷酸化，磷酸化的Rb释放核转录因子E2F-1，促进相关基因的表达，引起细胞分裂和转化。p16可与cyclinD1竞争CDK4／6，抑制其激酶活性，阻止Rb的磷酸化和E2F-1的释放，使细胞分裂不能通过G1-S调控点而被阻滞于G1晚期。p16-cyclinD1-Rb通路各组分表达的异常与肿瘤关系密切，但其在牙源性角化囊肿(Odontogenic keratocyst，OKC)和成釉细胞瘤(Ameloblastoma，AB)中的表达情况报道很少，结果并不十分一致。 AB是颌骨内最常见的牙源性肿瘤，虽然它被确定为良性肿瘤，但由于其局部呈侵袭性生长，易复发，可恶变，引起了口腔外科和病理界的广泛关注。OKC也为颌骨内常见的、最具侵袭性的囊肿，其上皮增生特性及生物学行为与AB相似。本实验采用原位杂交方法和免疫组化方法检测AB和OKC中cyclinD1和p16的表达，并进行比较和相关性分析，旨在探讨cyclinD1和p16的表达异常在AB及OKC发展中的作用，研究AB的细胞分化与其临床生物学行为的关系，为肿瘤的诊断、治疗和预后提供有力的理论依据。 材料与方法 原位杂交和免疫组化所用标本取自中国医科大学附属第一医院病理科1996一2001年存档蜡块，共收集成釉细胞瘤54例(原发31例，复发19例，恶变4例)，OKC7例。原位杂交探针由北京大学医学部病理系提供。免疫组化法采用链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶法(S一P法)。结果判定:(l)原位杂交:cyclinDI或P16的胞浆中出现紫蓝色颗粒为阳性着色:<10%计(一)，10%40%计(+)，40%一0%计(++)，>70%计(+++)。(2)免疫组化:cyclinDI、p16的细胞核出现棕黄色颗粒为阳性，低倍镜(x40、x100)下观察每例切片，然后在高倍镜(x 200)下计数阳性细胞核数目。统计方法采用SPSS10.0统计软件，进行ANOvA方差分析、x，检验和Kendall相关分析，P<0 .05具有统计学意义。结果 eyelinDI mRNA阳性表达部位在胞浆。7例OKC中有3例(42.9%)阳性，表达的范围由基底层向副基底层细胞扩展，阳性以弱至中度阳性为主。54例AB有23例(42.6%)阳性，表达主要以中、高度为主，阳性部位主要位于外周柱状或立方状细胞及散在或密集增生的多边形、梭形细胞中，角化退变样细胞及颗粒性变细胞为阴性。把AB按临床生物学行为分组(原发31例，复发19例，恶变4例)，从表达趋势看，伴随着AB的复发恶变，cyclinDImRNA阳性率及表达强度增高(P<0.05)。此外我们把AB中cyclinDImRNA的表达与其临床发生的年龄、性别、部位及组织病理学分型进行了统计学相关性分析，无显著统计学意义(P>0.05)。cyclinDI蛋白着色主要位于胞核。在OKC主要表达于基底层或副基底层的细胞核中，在AB表达于外周层及散在星网状层细胞核中。随着细胞的密集增生，核阳性数目增多，但在角化退变样细胞及颗粒性变细胞中阳性细胞较少或为阴性。伴随着AB的复发和恶变，阳性核数目增多，经方差分析三组间差异有极显著性(F二5.942，P二0.的4)。扩检验表明cyclir山1功RNA与蛋白表达具有一致性(P<0 .05)，表达一致率为64.8%。 p16 mRNA阳性表达部位在胞浆，其在oKC和AB中的表达范围与cy-clinDI mRNA相似，但间质中的纤维细胞也有少量表达。表达程度较cy-dinDlmRNA弱，以弱至中度阳性为主。伴随着AB的复发和恶变，pl6 mR-NA的表达丢失率增高，表达强度下降(P<0.05)。p16蛋白定位于OKc和AB的上皮细胞核内。在OKc中只有1例核阳性，主要位于棘细胞层。大多数AB为阴性表达。我们发现19例AB的星网状细胞有不同程度的角化和囊性变，pl6蛋白多在已发生角化的上皮样细胞中有弱表达，但在星网状层中的原始胚胎样细胞和外周细胞，尤其是核浓染细胞密集的蕾状增生区细胞为阴性。同样将AB分为原发、复发和恶变三组其表达水平逐渐下降，方差分析有统计学意义(F=5.肠0，P<0.05)。xZ检验表明pl6 mRNA与蛋白表达具有一致性(P<0.05)，表达一致率为70.4%。此外我们把AB中P16 mRNA的表达与其临床发生的年龄、性别、部位及组织病理学分型进行了统计学相关性分析，无显著统计学意义(P>0.05)。对AB组中cy-clinDlmRNA与p16mRNA的表达进行相关性分析，发现二者表达呈负相关，Kendall相关系数rk二刃.342，p<0.01。讨论 细胞周期不同时相存在关键的调控点，最重要的是Gl和S期之间的调控点，肿瘤细胞的主要特征为失控性生长，因此?