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为监控动物性食品中抗菌药物残留,保障人民健康,本实验研究微生物法快速筛选试剂盒的开发与应用,即用于猪肾组织中抗菌药物残留检测的在场拭子法试剂盒(Swab Test On Premises,STOP),抗菌药物快速筛选试剂盒(Fast Antimicrobial Screening Test,FAST)和用于猪活体尿液中抗菌药物残留筛选的活体动物拭子法(Live Animal Swab Test,LAST)。FAST试剂盒培养基pH为7.3,接种巨大芽孢杆菌。本实验中研发的STOP和LAST试剂盒培养基相同,pH为7.3,接种枯草芽孢杆菌。 本实验中用添加法测定了STOP和LAST试剂盒对青霉素、氨苄青霉素(β-内酰胺类),金霉素(四环素类),新霉素、庆大霉素(氨基糖甙类),恩诺沙星(喹诺酮类)以及红霉素(大环内酯类)等不同种类抗菌药物的检测限。结果表明,对于以上7种常用的抗菌药物,STOP和LAST试剂盒的检测限不超过我国规定的最高残留限量。 实验中用添加法测定了STOP和LAST试剂盒对以上7种抗菌药物(每种药物3个浓度。包含最低检测限)的回收率及变异系数。STOP试剂盒回收率范围:青霉素51.5%~95.7%、氨苄青霉素68.5%~102.3%、红霉素51.4%~82.3%、金霉素52.7%~88.9%、庆大霉素51.4%~87.3%、新霉素50.5%~89.0%、恩诺沙星46.1%~79.4%。批间变异系数均小于15%,批内变异系数不超过10.1%。LAST试剂盒的回收率范围:青霉素41.4%~90.5%、氨苄青霉素77.6%~107.3%、红霉素79.8%~124.7%、庆大霉素65.9%~118.8%、新霉素73.6%~107.7%、金霉素42.2%~61.4%、恩诺沙星53.1%~99.6%。回收率的批间变异系数均小于15%,批内变异系数不超过14.2%。 在最高残留限量浓度,分别测定了STOP、LAST、和FAST试剂盒对以上7种药物的假阴性,其假阴性率分别为:STOP试剂盒,青霉素4.3%、氨苄青霉素4.0%,其他5种抗菌药物没有发现假阴性。LAST的试剂盒,青霉素7%、氨苄青霉素4%,其他5种抗菌药物没有发现假阴性。FAST试剂盒,青霉素12%,其他6种抗菌药物没有发现假阴性。 对于10种常用的抗菌药物(包括磺胺二甲嘧啶、氯霉素、林可霉素和三甲氧苄胺嘧啶,组织中每种药物添加3个浓度),STOP、LAST、FAST试剂盒同国外同种产品做了比较,结果表明三种试剂盒达到或接近国外同种产品的检测水平。 2002年5~6月,用STOP试剂盒抽样分析了武汉市市售动物性食品(猪肾105份、猪肝100份、肌肉100份)中抗菌药物残留的情况。结果发现,45份肝组织、14份肾组织、1份肌肉中出现阳性结果,说明当前的残留问题不容乐观。试剂盒的稳定性(菌液、培养基、纸片)考察表明,三种试剂盒中应用芽孢悬液以及STOP检测用培养基至少2个月内可以保持有效,新霉素阳性对照纸片9个月来效价没有显著变化。 本实验研究填补了我国抗菌药物残留微生物筛选方法的空白,具有重要的学术意义和应用价值。本实验研究的三种试剂盒(STOP、LAST、FAST)作为国内首次开发的抗菌药物残留微生物快速检测工具,具有应用面广、操作简便、性能稳定、成本低廉等诸多优点,将会广泛适用于检疫部门对动物性食品中抗菌药物残留的日常检测、进出口检疫以及养殖场、屠宰场、肉联厂、食品加工厂进行的在场残留检测工作,具有较大的市场开发价值和应用前景。