论文部分内容阅读
2004年8月,东北林业大学野生动物疾病教研室从黑龙江省的扎龙自然保护区的野鸭体内分离到一株H4N6亚型禽流感病毒,命名为A/Mallard/ZhaLong/88/04(H4N6)(MZL88/04)。 本研究采用无特定病原体(SPF)鸡胚增殖禽流感病毒野鸭源分离株MZL88/04,从鸡胚尿囊液中提取病毒基因组RNA和MRNA,参考GenBank中相应的核苷酸序列设计并合成了12对特异性引物,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增MZL88/04分离株的8个基因片段的CDNA,其中HA、PA、PB1、PB2 4个基因均分为两段扩增。PCR产物经回收纯化后连接到PMD18-T载体上,将连接产物转入DH5-α感受态细胞中,重组质粒经PCR鉴定为阳性后,进行序列测定。序列测定正确后,用专业分析软件与国内外H4N6亚型的部分分离株的相应基因及其推倒的氨基酸序列进行同源性比较和遗传进化分析。 测序结果表明,扩增的8个基因片断均含有完整的开放阅读框架,部分基因片断含有5’端和3’端的非编码区序列。通过对分离株MZL88/04与世界各地H4N6代表株的核苷酸和氨基酸同源性以及遗传演化结果的分析,证实分离株MZL88/04起源于欧亚群系,与南昌地区流感病毒分离株遗传关系密切,相应基因有着相似的遗传演化过程,可能具有共同祖先。由于H4N6亚型禽流感病毒还没有高致病力毒株的报道,并且通过对血凝素裂解位点氨基酸组成的分析,说明禽流感病毒扎龙分离株MZL88/04为非高致病力毒株。 从野生禽鸟中分离出H4N6亚型禽流感病毒在中国大陆尚无报道,所以此株H4N6亚型禽流感病毒全基因的克隆及序列分析结果,对于禽流感的深入研究,特别是对野生水禽禽流感病毒的携带状况和分子流行病学的研究具有重要的参考价值。