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以巴西橡胶树(Hevea brasiliensis Mull.Arg.)无性系ZY7—33—97萌条为实验材料,采用石蜡切片技术,结合放射自显影、同位素示踪和冰冻切片技术,研究外源茉莉酸的移动及其对乳管分化的诱导效应。 饲喂~3H—JA的萌条茎用2%EDC+4%戊二醛(0.1 mol/L磷酸盐缓冲液,pH7.2)固定后,进行石蜡切片的放射自显影,~3H—JA在组织中的分布式样与冰冻切片的放射自显影相似,说明我们所建立的对~3H—JA的石蜡切片放射自显影技术可以用来分析外源~3H—JA在橡胶树体内的运输。 已有研究表明外源JA在进入植物体内5天之内都是以游离状态存在的,因此在本实验的时间内有黑色银粒的放射性部位既能表明是JA存在的位置。放射自显影结果表明:~3H—JA在植株体内快速运输,在1分钟内,饲喂的~3H—JA在施用部位径向上已达木质部;在5分钟内,施用部位上下10cm的树皮和木质部中均有~3H—JA。施用部位的材料自显影片中,木质部和韧皮部以及形成层中含有大量的黑色银粒,说明有放射性的~3H—JA存在,可见在横向上JA可以通过韧皮部经由形成层运输到木质部。在切片中可以清晰的见到射线细胞中的黑色银粒的量很大,导管细胞壁周围也含有大量黑色银粒。故而推测射线细胞、导管都是JA重要的运输通道。在5min和30min,在施用~3H—JA部位的上下5cm和10cm处的茎中,木质部和韧皮部中含有黑色银粒,但在表皮和皮层薄壁细胞中则无,说明JA是通过木质部和韧皮部进行长距离运输的。 同位素示踪结果表明,外施JA在进入植株体内后,大部分集中在施用位置,与其它部位的放射性强度有极显著差异(P<0.01),表现出很强的局域性。伤害处理的10min样品放射性强度明显低于不受伤害处理10min样品放射性强度,且60min之后的放射性强度变化较小。可见伤害能明显阻止外源JA的进入(P<0.01),但同时也阻止进入了的JA再向其它部位转移,而主要集中在施用部位。在处理中,新梢有较高的放射性强度,仅次于施用位置,与其它几个部位相比较差异显著(P<0.05)且随着时间延长,放射性强度增加。伤害减少运输到新梢中的含量,史敏晶外源茉莉酸的移动与巴西橄胶树次生乳管分化的研究但与不受伤相比差异不显著(P>0.05)。施用部位之上的scm和IOcm处也有较强的放射性强度,施用部位之下的scm和10cm处则稍弱,但这四个部位的差异不显著(P>0.05),表明JA在巴西橡胶树中可以同时向上和向下运输,即能双向运输。在施用部位,JA主要存在于树皮中,木质部中虽有一定的含量,但二者差异极显著(P<0.01). 用非放射性的0.07%JA(重量百分比)处理萌条的第一伸长单位,40天后,在施用部位诱导出一列次生乳管,该乳管列距维管形成层区3一6层细胞。此时,在施用部位上下scm和IOcm的树皮中也出现了次生乳管,距维管形成层区也是大约2一6层细胞,这应当与外源茉莉酸的移动有关。茉莉酸的诱导作用还表现出叠加效应,同一萌条的不同伸长单位同时用0.07%JA处理,比单一部位处理更容易诱导乳管的分化。茉莉酸是诱导乳管分化的关键信号分子,但茉莉酸的诱导效应也受生长季节和萌条年龄的影响。发育越成熟的伸长单位越易诱导出次生乳管。 我们的结果表明,外施的JA主要集中在施用部位,同时也可以通过韧皮部(主要)和木质部上下移动,体内高水平的JA是诱导乳管分化所必需的。