目的：　　阿尔茨海默病（Alzheimer’ s disease, AD）是最常见的痴呆类型，目前全球有超过4500万人遭受AD的困扰。流行病学研究表明，AD患病率存在性别差异，女性高于男性。但是，AD 性别差异在动物的脑内病理学特征，神经炎性反应和认知功能等方面的表现及其分子机制仍不十分清楚。本研究利用免疫组织化学实验， Western blot实验和Morris水迷宫实验，调查研究了不同性别的12月龄三转基因AD(3xTg-AD mice)小鼠的脑病理学特征及认知功能的性别差异，并从神经炎性和信号转导通路方面研究了AD性别差异的可能的机制。　　方法：　　实验采用 12 月龄的雄性和雌性 APPSwe/PS1M146V/tauP301L 三转 AD （3xTg-AD）小鼠及野生型（wild type, WT）C57BL/6J小鼠，随机分为四组：WT雄性组（WT + Male）、3xTg-AD雄性组（3xTg-AD + Male）、WT雌性组（WT +Female）、3xTg-AD雌性组（3xTg-AD+Female）。用于免疫组化和分子生物学实验的动物为每组6只，用于行为实验的动物为每组10只。所有动物购买自美国Jackson Laboratory，经山西动物研究伦理委员会批准在山西医科大学实验动物中心饲养。饲养环境及温度湿度舒适，自由进食和饮水。　　（1）免疫组织化学实验：腹腔注射 25%乌拉坦麻醉，心脏灌注以及前固定，之后将脑组织后固定并脱水，分别至于-80℃冰箱和石蜡包埋进行保存，以供冰冻切片和石蜡切片之需。i) 冰冻切片：脑片厚度为25μm，5%山羊血清封闭，一抗4℃过夜，二抗孵育，DAB显色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。每步用PBS清洗3次，每次5分钟。普通显微镜下观察比较各组小鼠海马区Aβ（6E10）斑块的面积，星形胶质细胞（astrocyte，GFAP）和小胶质细胞（microglia，Iba-1）的面积。ii）石蜡切片：脑片厚度为 2μm，二甲苯及梯度酒精脱蜡至水，3%H2O2消除过氧化物酶，高压抗原修复，5%山羊血清封闭，一抗 37℃孵育 1小时，兔二步法试剂盒进行孵育，DAB显色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。每步用PBS清洗3次，每次3分钟。普通显微镜下观察比较各组小鼠海马区磷酸化tau蛋白的数量及面积。　　（2）Western blot实验：腹腔注射25%乌拉坦麻醉，冰上快速断头取海马，锡箔纸包裹至-80℃冰箱保存。从海马组织提取并测量总蛋白浓度，制备凝胶，加样，电泳，转膜，5%BSA封闭，一抗孵育4℃过夜，二抗孵育，ECL发光液显影曝光。使用AlphaView系统进行分析目标条带（p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, p-p38, p38,β-actin, GAPDH）的光密度值。　　（3）Morris水迷宫实验： Morris水迷宫实验用于检测动物的空间学习和记忆能力。实验小鼠环境适应7天后，首先对小鼠进行连续5天的定位航行实验。然后在第6天进行空间探索实验，24小时以后进行可视平台实验。分别记录各组小鼠的逃避潜伏期，游泳速度及在目标象限游泳时间。　　结果：　　（1）海马脑区Aβ免疫阳性斑块：3xTg-AD组与WT组相比，两组小鼠海马脑区均有Aβ免疫阳性斑块沉积，但是3xTg-AD组比WT组Aβ斑块沉积的数量多，面积大（P <0.05）；3xTg-AD组内不同性别小鼠之间相比，雌性3xTg-AD小鼠海马脑区Aβ免疫阳性斑块的大小和数量较雄性3xTg-AD小鼠明显增多（P<0.05）；　　（2）海马脑区神经原纤维缠结：WT组和3xTg-AD组小鼠海马脑区均有神经原纤维缠结形成，但3xTg-AD组比WT组小鼠海马脑区p-tau数量增多，面积增大（P <0.05）；雌性3xTg-AD小鼠海马脑区p-tau数量和面积较雄性3xTg-AD小鼠明显增多（P<0.05）；　　（3）海马脑区神经胶质细胞：WT组和3xTg-AD组小鼠海马脑区均有神经胶质细胞（Iba-1和GFAP）的激活，但3xTg-AD组比WT组小鼠神经胶质细胞激活数量增多，面积增大（P <0.05）；雌性3xTg-AD小鼠海马脑区的胶质细胞激活数 量和面积均较雄性3xTg-AD小鼠明显增多（P<0.05）；　　（4）海马p-PKA, p-CREB和p-p38表达：3xTg-AD组小鼠海马区的p-PKA, p-CREB的表达水平较WT组明显减少（P<0.05），但雌性3xTg-AD小鼠海马脑区p-PKA, p-CREB的表达水平较雄性3xTg-AD小鼠更减少（P<0.05）；3xTg-AD组小鼠海马区p-p38的表达水平较WT组明显增多（P <0.05），尤以雌性3xTg-AD小鼠为重（P<0.05）。　　（5）Morris水迷宫实验：在第1-5天的定位航行实验中，随着训练天数的增加，四组小鼠寻找水下平台时间明显缩短。从第三天开始，3xTg-AD组小鼠寻找水下平台时间较WT组小鼠明显延长（P<0.05），特别是雌性3xTg-AD小鼠组（P<0.05）；在第六天空间探索实验中，3xTg-AD组小鼠目标象限游泳时间百分比明显低于WT组小鼠（P<0.05），雌性3xTg-AD小鼠更为明显。各组小鼠的游泳速度没有统计学差异（P>0.05），可视平台实验中，各组小鼠到达平台时间无统计学差异（P>0.05）。　　结论：　　（1）与同龄WT小鼠比较，12月龄的3xTg-AD小鼠脑内均出现典型的AD样病理特征，包括Aβ斑块、神经原纤维缠结和神经炎性反应以及认知行为伤害；　　（2）在3xTg-AD小鼠中，各种病理学特征，胶质细胞炎性反应和认知功能都表现出程度不等的性别差异，雌性小鼠表现有更突出的 Aβ 沉积、神经原纤维缠结和炎症反应以及认知功能损害；　　（3）3xTg-AD小鼠病理特征以及认知功能的性差异可能与PKA-CREB-MAPK信号通路的激活水平差异有关。　　以上结果、结论为采用不同性别AD动物进行的病理学特征和认知功能研究提供了重要的参考依据，同时也为雌激素替代疗法的应用提供了一定的实验证据。