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BAFF为B淋巴细胞刺激因子,属于肿瘤坏死因子超家族中的一员,在B淋巴细胞的发展,成熟,抗体分泌过程中起重要的作用,是正常机体免疫必不可少的。研究发现BAFF表达失调与许多疾病之间存在一定的联系,如自身免疫缺陷、系统性红斑狼疮(SLE)、感染和恶性肿瘤等等。目前,针对BAFF的拮抗剂主要有:抗BAFF抗体,BAFF受体抑制剂、BAFF相关免疫毒素等等。其中BAFF单克隆抗体-Belimumab已获得美国FDA的批准,应用于治疗SLE疾病,这充分肯定了以BAFF为靶点治疗疾病的可行性。但是,在BAFF拮抗剂的临床应用中,仍有很多问题有待解决,例如,稳定性和副作用。本课题的主要目的是研究三个多肽对BAFF与其受体结合的抑制作用,进而探索小分子多肽作为BAFF拮抗剂的可行性,为BAFF拮抗肽的研发和临床试验提供参考。这三个多肽分别为TA、TC和BC,均为通过InsightII软件,根据TACI-BAFF、BCMA-BAFF的相互作用所涉及到的关键的氨基酸残基,结合分子对接法,而设计得到。 本课题主要的研究方法为,采用菌液PCR、重组质粒双酶切法和基因测序验证重组子TACI-Fc和BCMA-Fc的正确性。之后转入原核表达宿主细胞中,进行大量表达,最后通过蛋白A柱进行纯化融合蛋白。通过间接ELISA试验考察所得融合蛋白与BAFF的结合活性,最后通过竞争ELISA试验研究多肽对BAFF-TACI和BAFF-BCMA结合的抑制作用。具体研究成果如下: (1)验证了实验室保存的pET28a-TACI-Fc和pET30a-BCMA-Fc重组子的正确性,并且成功进行了这两个融合蛋白的原核系统可溶性表达。 (2)通过间接ELISA试验考察了所得融合蛋白与BAFF的结合活性,并且确定了BAFF-TACI-Fc和BAFF-BCMA-Fc结合的最佳饱和浓度,分别为5ng/μL和30ng/μL。 (3)竞争ELISA试验证明三个多肽TA、TC和BC都对BAFF-TACI和BAFF-BCMA结合有一定的抑制作用,并且不同多肽两两混合之后增强了抑制作用,抑制率随着随着多肽的浓度的增加而增大。当多肽的浓度为100ng/μL时,TA、TC、BC、TA+BC、TA+TC和BC+TC对BCMA-BAFF的抑制率分别为42.2％、44.8%、48.6%、46.4%、46.6%和56.3%;对TACI-BAFF的抑制率分别为30.8%、40.9%、40.3%、34.6%、43.9%和44.6%。为多肽的进一步研究打下了良好基础。