自高效液相色谱法建立以来,关于色谱固定相的研究一直是色谱工作者的一个重要研究领域。近年来,由于人们对中草药的重新重视,使中药得以迅速发展并被广泛应用于多种疾病的预防和治疗中。但中药结构复杂,对其进行分离研究需要具有多种分离功能的色谱固定相。中药活性成分由于具有独特的结构,能与多种物质发生作用,其用作分离材料更适用于中草药的分离。为此,人们制备了一系列新型中药有效成分高效液相色谱键合固定相。本论文在前人研究的基础上,以大黄酸为原料制备了两种固定相,分别对它们进行了结构表征和高效液相色谱性能评价,初步探讨了其色谱保留机理,并对两种新固定相进行了色谱应用研究。主要研究内容包括：1、以γ-氨丙基三乙氧基硅烷为偶联剂制备了酰胺型大黄酸键合硅胶固定相。2、以γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷为偶联剂制备了酯型大黄酸键合硅胶固定相。3、研究了新制备的酰胺型固定相在简单流动相甲醇-水条件下对两种异黄酮化合物的分离测定。4、用常见的两种生物碱基研究了新制酯型固定相的分离性能。1.酰胺型大黄酸键合硅胶固定相的简便制备及色谱性能评价以大黄酸为原料,γ-氨丙基三乙氧基硅烷为偶联剂,简便制备了一种酰胺型羧基键合硅胶固定相(RBSP),并用红外光谱、热重分析及元素分析对其结构进行表征。考察了流动相中甲醇含量对键合固定相的影响,并以含酸性、中性和碱性化合物的混合物为溶质,评价了RBSP的色谱性能。以甲醇-水为流动相,用C18柱作参比,研究了该键合固定相对两种大豆异黄酮化合物和几种生物碱基的分离,并对其色谱分离机理进行了初步探讨。实验结果表明,该固定相(RBSP)具有较好的反相色谱性能,同时由于键合相中含有酚羟基及酰胺基团,能为多种溶质提供作用位点,对极性化合物的分离具有明显优势,且分离速度快,可有效用于极性化合物的分离分析。2.酯型大黄酸键合硅胶固定相的制备及其色谱性能评价本研究以γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷为偶联剂与大黄酸反应,制备了酯型大黄酸键合硅胶固定相(RESP),用多种手段对其结构进行了表征,以多种溶质探针对其色谱性能进行了综合评价,并与传统C18柱相比较。结果表明,由于键合相上存在酯基和大黄酸的蒽醌结构单元,能抑制硅胶上残存硅醇基的活性,可有效实现对多种化合物的分离。3.酰胺型大黄酸键合硅胶固定相对两种异黄酮化合物的分析应用研究了两种异黄酮化合物大豆甙和黄豆黄甙在酰胺型大黄酸键合相(RBSP)上的色谱行为,并与C18柱相比较,通过改变流动相的组成考察了两种化合物在该固定相上的保留行为。实验结果表明,与C18相比,在相同色谱条件下,RBSP在以简单流动相甲醇-水(V／V=75／25)条件下,能实现对两种异黄酮化合物的快速分离,但洗脱顺序与C18柱相反,说明RBSP柱与C18柱存在不同的保留机理。4.酯型大黄酸键合硅胶固定相对两种碱基的分离测定本文以新制键合固定相(RESP)对碱基尿嘧啶(Uracil)和腺嘌呤(Adenine)进行分离研究,并与C18相比较。通过优化色谱条件,实现了对两种碱基的较好分离,并对尿样中尿嘧啶和腺嘌呤进行了分离测定。实验发现,两种碱基在RESP和C18上的出峰顺序一致,表明RESP的分离也主要基于疏水作用。