论文部分内容阅读
目的：初步探讨单腺苷二磷酸核糖基化转移酶-1（mono(ADP-ribosyl)transferase-1，ART1）基因沉默与过表达对小鼠结肠癌CT26应力纤维的影响在该细胞黏附和运动能力中的作用及其可能的机制。方法：以携带ART1-shRNA与ART1基因过表达的重组慢病毒分别感染小鼠结肠癌CT26细胞；以未感染CT26细胞组（未处理组（Untreated））、感染慢病毒空载体的细胞（阴性对照组（NC-shRNA））为对照，感染携带ART1-shRNA慢病毒的细胞（基因沉默组（ART1-shRNA））、感染ART1基因过表达慢病毒的细胞（过表达组（ART1-overexpression））为实验组,；RT-PCR检测CT26细胞ART1mRNA表达变化；激光共聚焦观察微丝形态变化；通过黏附、迁移和侵袭实验观察ART1-shRNA和ART1过表达对CT26细胞基质黏附、运动和侵袭能力的影响。小鼠脾脏包膜下接种各组细胞，构建BALB/c小鼠结肠癌肝转移模型并相应分组，比较各组小鼠脾脏移植瘤大小、肝脏转移瘤结节数和荷瘤小鼠生存时间差异；采用Western blot检测ART1,RhoA,integrinβ1，FAK在各组CT26细胞及脾脏移植瘤组织中的表达情况。结果：1成功获得ART1-shRNA，ART1-overexpression，NC-shRNA细胞株，RT-PCR和WB结果显示：ART1-shRNA组的ART1mRNA和ART1蛋白比Untreated组和NC-shRNA组表达显著降低（P<0.05），ART1-overexpression组的ART1mRNA和ART1蛋白比Untreated组和NC-shRNA组表达显著增高（P<0.05），而Untreated组较NC-shRNA组ART1mRNA和ART1蛋白的表达无明显差异（P>0.05）2激光共聚焦显示：与Untreated组比较，ART1-shRNA组细胞应力纤维形成明显减少（P<0.05），ART1-overexpression组应力纤维形成明显增加（P<0.05）；细胞黏附实验，迁移和侵袭实验结果显示：ART1-shRNA组细胞的黏附、迁移和侵袭能力较Untreated组和NC-shRNA组明显减弱（P<0.05），ART1-overexpression较Untreated组和NC-shRNA组明显增强（P<0.05），Untreated组与NC-shRNA组无明显差异（P>0.05）。3成功构建小鼠结肠癌肝转移模型，各组小鼠脾脏均有移植瘤形成，ART1-shRNA组移植瘤的体积、重量和肝脏转移瘤结节数较Untreated组和NC-shRNA组明显减小（P<0.05），ART1-overexpression组移植瘤的体积、重量和肝脏转移瘤结节数较Untreated组和NC-shRNA组明显增加（P<0.05），但Untreated组与NC-shRNA组无明显差异（P>0.05）。Kaplan-Meier生存曲线显示接种ART1-shRNA组CT26细胞的荷瘤小鼠生存时间明显延长（P<0.05）、接种ART1-overexpression组CT26细胞的荷瘤小鼠生存时间明显缩短（P<0.05），而Untreated组与NC-shRNA组无明显差异（P>0.05）。4WB结果提示：ART1-shRNA组脾脏移植瘤组织中ART1蛋白表达明显低于Untreated组（P<0.05），ART1-overexpression组脾脏移植瘤组织中ART1蛋白表达明显高于Untreated组（P<0.05），Untreated组与NC-shRNA组无明显差异（P>0.05）。ART1-shRNA组细胞和脾脏移植瘤组织中RhoA,integrinβ1，FAK蛋白表达量明显低于Untreated组（P<0.05）， ART1-overexpression组细胞和脾脏移植瘤组织中RhoA,integrinβ1，FAK蛋白表达量明显高于Untreated组（P<0.05），Untreated组与NC-shRNA组无明显差异（P>0.05）。结论：实验结果表明ART1基因沉默可通过减少应力纤维的形成，降低CT26细胞的黏附、运动能力，抑制小鼠脾脏移植瘤和肝脏转移瘤结节形成；ART1基因过表达可通过促进应力纤维的形成，增加细胞的黏附、运动能力，促进小鼠脾脏移植瘤生长及肝脏转移。ART1在肿瘤细胞的侵袭转移过程中起调控作用，该作用可能与ART1影响RhoA,integrinβ1和FAK蛋白表达，进一步影响微丝的形态及功能有关。