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[目的]
研究Galc基因和CyclinD1蛋白在鼻咽癌细胞和鼻咽黏膜柱状上皮细胞中表达的关系及意义；研究用不同浓度去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycitydine，5-Aza-CdR)处理及转染Galc基因重组质粒pCMV6-XL4/Galc后，对不同鼻咽癌细胞系(株)GALC基因和CyclinD1蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响。初步探讨Galc基因在鼻咽癌中的功能。
[方法]
1.临床病理部分
(1)RT-PCR检测18例鼻咽癌(未分化型非角化性癌)和18例鼻咽黏膜慢性炎组织中Galc-mRNA的表达情况。
(2)免疫组织化学SP法检测51例鼻咽癌(未分化型非角化性癌)细胞、41例鼻咽黏膜柱状上皮细胞中GALC和CyclinD1蛋白的表达情况。
2.实验病理部分
(1)去甲基化药物5-Aza-CdR处理组：体外培养人永生化鼻咽上皮细胞系NP69-SV40T(作对照组)和鼻咽癌细胞系(株)CNE-1、CNE-2Z、CNE1-GL。设置实验组和对照组，用不同浓度5-Aza-CdR作用于上述鼻咽癌细胞不同的时间。
(2)转染组：体外培养鼻咽癌细胞系(株)CNE-1、CNE-2Z、CNE1-GL。设置实验组和对照组，用脂质体瞬时转染法将pCMV6-XL4/Galc重组质粒、空载质粒pCMV6-XL4和脂质体Lip-2000分别转染上述各种细胞后培养24h、48h、72h。
(3)用下列方法检测去甲基化药物组和转染组中的各项指标：①RT-PCR法检测Galc-mRNA表达情况；②CCK-8法检测细胞增殖情况；③流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况；④免疫细胞化学法检测GALC和CyclinD1蛋白表达情况；⑤用浓度为20uM/L5-Aza-CdR作用于CNE-2Z细胞72h，免疫荧光法检测GALC和CyclinD1蛋白的表达情况。。
[结果]
1.临床病理部分
(1)18例鼻咽癌和18例鼻咽黏膜慢性炎组织中Galc-mRNA表达的阳性率分别为44.44％和72.22％，两组间差异无统计学意义(P>0.05)。
(2)51例鼻咽癌细胞和41例鼻咽黏膜柱状上皮细胞中，GALC蛋白表达阳性率分别是33.33％和90.24％，两组间差异有显著统计学意义(P<0.01)；CyclinD1蛋白表达阳性率分别是78.43％和24.39％，两组间差异有显著统计学意义(P<0.01)。51例鼻咽癌中GALC和CyclinD1蛋白的阳性表达呈负相关关系(r=-0.343，P<0.05)。
2.实验病理部分
(1)RT-PCR法：①去甲基化药物处理组：不同浓度药物作用于CNE-2Z细胞24h，对照组和实验组细胞中Galc-mRNA均为阴性；②转染组：实验组转染pCMV6-XL4/Galc重组质粒48h，Galc-mRNA阳性表达，而对照组转脂质体组和转染空载质粒pCMV6-XL4组，Galc-mRNA阴性。
(2)CCK-8法：①去甲基化药物处理组：不同浓度药物作用于CNE-1、CNE-2Z、CNE1-GL细胞96h，各组细胞增殖均受抑制，组间差异均有显著统计学意义(P<0.01)；②转染组：实验组与对照组比较，细胞增殖受抑制，组间差异均有显著统计学意义(P<0.01)。
(3)FCM：①去甲基化药物处理组：不同浓度药物作用于CNE-1、CNE-2Z、CNE1-GL细胞96h，各组细胞均出现凋亡峰，用药20 uM/L和60 uM/L浓度组间凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05)，其余各组间凋亡指数差异均有显著统计学意义(P<0.01)；②转染组：CNE-1、CNE-2Z、CNE1-GL细胞转染pCMV6-XL4/Galc重组质粒48h，均出现凋亡峰，凋亡指数组间差异均有统计学意义(P<0.05)。
(4)免疫细胞化学法：①去甲基化药物处理组：对照组CNE-1、CNE-2Z细胞中GALC蛋白为阴性。而CyclinD1蛋白表达阳性率分别是(76.2±3.2)％和(86.8±2.4)％；用40uM/L浓度5-Aza-CdR分别作用于CNE-1和CNE-2Z细胞72h，GALC蛋白表达阳性率分别为(34.7±1.9)％和(27.6±2.1)％，CyclinD1蛋白表达阳性率分别是(49.4±2.3)％和(55.8±1.8)％，组间差异均有统计学意义(P<0.05)。②转染组：对照组CNE-1、CNE-2Z细胞中GALC蛋白为阴性，而CyclinD1蛋白表达阳性率分别是(69.3±2.5)％和(78.6±2.1)％；转染pCMV6-XL4/Galc重组质粒48h，GALC蛋白表达阳性率分别是(57.0±2.5)％和(45.0±2.8)％，CyclinD1蛋白表达阳性率分别是(39.6±1.1)％和(44.8±1.7)％，组间差异均有统计学意义(P<0.05)。
(5)免疫荧光法：CNE-2Z细胞中GALC蛋白阴性，CyclinD1蛋白阳性表达。用20uM/ml浓度5-Aza-CdR作用于CNE-2Z细胞72h，GALC蛋白弱阳性表达，CyclinD1蛋白阳性表达减弱。
[结论]
(1)Galc基因可能在鼻咽癌中扮演着抑癌基因的角色，并可能抑制CyclinD1调控的细胞增殖过程。
(2)鼻咽癌细胞中Galc基因失活可能与甲基化有关；Galc基因可能与凋亡和CyclinD1调控的细胞增殖有关。