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目的:1.人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染神经胶质瘤细胞U87,通过观察自噬体形态及数量的变化、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平的变化,从而研究HCMV感染对U87细胞自噬水平所产生的影响。2.HCMV感染U87后,检测自噬相关基因Beclin1及其蛋白的表达量,并检测细胞活性,从而探讨HCMV感染在神经胶质瘤在发生、发展过程中起到的作用及意义。方法与材料:1.HCMV AD169(MOI=5)感染神经胶质瘤细胞U87后,通过相差显微镜观察病毒感染6h、12h、24h、48h后的形态学改变。2.在HCMV AD169(MOI=5)病毒感染U87细胞6h、48h后,用透射电镜观察自噬小体的数目及形态。用HCMV AD169(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞6h、12h、24h、48h;并在各对应时间点用未感染的细胞作对照组。收集细胞并用Western-blot和免疫荧光对LC3编码蛋白表达水平进行检测。3.用HCMV AD169(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞,分别在6h、12h、24h、48h后收集细胞;同时将未感染的细胞作为对照。用RT-PCR检测基因Beclin1的表达;并用Western-blot和免疫荧光对Beclin1蛋白进行检测。4.CCK-8法对神经胶质瘤细胞U87的增殖活性的情况进行检测。结果:1.HCMV感染U87细胞6h、12h、24h、48h后,细胞形态明显发生变化。2.在电镜下观察HCMV感染U87细胞6h、48h后的自噬小体数目及形态。结果显示,相比较6h的自噬体数目,在48h时自噬体数量明显减少;并于6h、8h时在镜下分别观察到初始自噬小体(Initial autophagic vacuole,AVi)和晚期自噬小体(Late/Degradative autophagic vacuole,AVd),自噬小体均具膜结构,且在胞浆内可观察到未完全降解或者已降解的细胞器等。Western-blot结果显示,HCMV感染U87细胞6 h、12h、24 h、48 h后,LC3-II相对表达水平逐渐下降(P<0.05);LC3-II/I相对表达量也呈下调趋势(P<0.01)。而未感染组LC3-II、LC3-II/I蛋白相对表达量未有明显变化(P>0.05)。其结果与免疫荧光结果一致,均证实LC3蛋白表达水平明显减少。3.PCR检测结果显示,与对照组相比,感染组Beclin1m RNA相对表达量逐渐减少(P﹤0.01)。Western-blot结果显示,与未感染组相比,HCMV感染U87细胞6 h、12h、24 h、48 h,Beclin1相对表达量逐渐下降(P<0.05)。其结果与免疫荧光结果一致,证实Beclin1表达水平明显减少。4.CCK-8结果显示,HCMV感染U87细胞6 h、12h、24 h、48 h后,细胞活性逐渐增高(P﹤0.01)。结论:1.HCMV感染胶质瘤U87细胞后,自噬受到抑制。2.HCMV感染神经胶质瘤U87细胞导致Beclin1基因及蛋白表达量下降,且细胞活性逐渐增强,即HCMV诱导胶质瘤细胞U87的增殖可能受Beclin1蛋白的调控。