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目的:趋化因子受体9(chemokine receptor 9,CCR9)与多种恶性肿瘤有着千丝万缕的联系,在多种恶性肿瘤的发生、发展中起着不可忽视的重要作用。本文旨在检测趋化因子受体CCR9在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达水平,分析其与临床病理特征之间的关系,并探讨CCL25/CCR9生物轴对NSCLC细胞侵袭迁移的影响以及与因子VEGF-C、VEGF-D、MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP2之间的关系。为进一步阐明NSCLC在淋巴结转移过程中的具体分子调控机制提供参考。方法:1.选取2012年9月至2015年12月在广西壮族自治区人民医院胸心外科行手术治疗的NSCLC患者共60例,收集其手术切除的肿瘤组织及癌旁组织石蜡包埋标本。采用免疫组化PV-9000二步法检测肿瘤组织和癌旁组织中CCR9与VEGF、MMP2、MMP9的表达情况,分析肿瘤组织CCR9表达与临床病理特征及其他蛋白表达间的相关关系,以及肿瘤组织中VEGF、MMP2、MMP9的表达与淋巴结转移间的关系。2.将非小细胞肺癌细胞株A549和SK-MES-1进行药物处理并分组(空白对照组,CCL25 组,CCL25+anti-CCR9 组),通过 Transwell 实验分析 CCL25/CCR9 生物轴对NSCLC细胞侵袭迁移的影响;运用Western-Blot、RT-PCR技术从蛋白水平、基因水平检测因子 VEGF-C、VEGF-D、MMP2、MMP9、TIMP1 和 TIMP2 的表达,进一步探索CCL25/CCR9生物轴在非小细胞肺癌淋巴结转移中所发挥的作用及具体的分子调控通路。结果:1.免疫组化结果显示:肿瘤组织CCR9、VEGF、MMP2、MMP9蛋白的阳性表达率均高于癌旁组织(65.00%vs.25.00%,51.67%vs.16.67%,60.00%vs.18.33%,55.00%vs.10.00%,P<0.05)。腺癌、淋巴结转移患者的肿瘤组织CCR9阳性表达率分别高于鳞癌、无淋巴结转移患者(77.14%vs.48.00%,77.78%vs.26.67%,P<0.05),淋巴结转移患者肿瘤组织MMP2及MMP9的阳性表达率均高于无淋巴结转移患者(68.89%vs.33.33%,66.67%vs.20.00%,P<0.05)。VEGF 阳性表达、MMP2 阳性表达、MMP9阳性表达患者的肿瘤组织CCR9阳性表达率分别高于VEGF阴性表达、MMP2 阴性表达、MMP9 阴性表达患者(80.65%vs.48.28%,75.00%vs.50.00%,87.88%vs.37.04%,P<0.05),且在淋巴结转移患者中,肿瘤组织CCR9的表达与VEGF、MMP2 及 MMP9 蛋白的表达均呈正相关(r=0.339,P<0.05;r=0.257,P<0.05;r=0.530,P<0.05)。2.RT-PCR结果显示:对于腺癌A549和鳞癌SK-MES-1细胞中的VEGF-C,VEGF-D,MMP2,TIMP-2 表达,CCL25 组高于空白对照组和 CCL25+anti-CCR9 组(P均<0.05),差异有统计学意义。腺癌细胞A549中MMP-9、TIMP-1蛋白的表达,CCL25组高于空白对照组和CCL25+anti-CCR9组(P<0.05)。鳞癌细胞SK-MES-1中未发现MMP-9的表达,TIMP-1的表达组间无统计学差异(P>0.05)。3.Western-Blot结果显示:对于腺癌A549和鳞癌SK-MES-1细胞中的VEGF-C、VEGF-D、MMP2、TIMP-1及TIMP-2蛋白表达,CCL25组高于空白对照组和CCL25+anti-CCR9组(P均<0.05),差异有统计学意义。MMP-9蛋白的表达只在腺癌细胞A549中发现,而且CCL25组高于空白对照组和CCL25+anti-CCR9组(P均<0.05),差异有统计学意义。4.Transwell细胞迁移实验结果显示:与空白对照组及CCL25+anti-CCR9组相比,CCL25组的腺癌细胞A549和鳞癌细胞SK-MES-1都表现出更高的迁移趋势(280±17vs.159±14、115±9,198±11vs.97±12、72±7,P<0.05),差异有统计学意义。侵袭实验中,与空白对照组及CCL25+anti-CCR9组相比,CCL25组两组细胞的侵袭趋势也表现地更加显著(101±10 vs.30±7、53±7,63±9 vs.11±3、31±8,P<0.05)结论:1.CCR9在非小细胞肺癌组织中高表达,在癌组织中的表达明显高于相应的癌旁组织;同时CCR9的表达与患者组织学类型、临床病理分期、是否合并淋巴结转移密切相关,可能预示肿瘤的高侵袭性与预后不良。2.相较于癌旁组织,CCR9与VEGF、MMP2及MMP9蛋白在非小细胞肺癌组织中的共同高表达,提示CCR9可能参与调节非小细胞肺癌的淋巴结转移,并且调节作用与VEGF、MMP2及MMP9关系密切。3.通过对两组非小细胞肺癌细胞株A549和SK-MES-1的药物处理,并检测因子 VEGF-C、VEGF-D、MMP2、MMP9、TIMP1 和 TIMP2 蛋白、mRNA 表达和细胞侵袭迁移能力。实验结果表明,CCL25/CCR9生物轴能显著调节因子VEGF-C,VEGF-D,MMP2,TIMP2的表达和非小细胞肺癌细胞的侵袭迁移能力。这提示CCL25/CCR9 生物轴或许能通过调节 VEGF-C、VEGF-D、MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP2等因子的表达进而影响非小细胞肺癌的侵袭、迁移及淋巴结转移等过程。