本研究将合成的人表皮生长因子基因及从真菌中所克隆的免疫调节蛋白基因分别转入烟草中,并对它们的表达特性进行了分析。 在表皮生长因子的转基因研究中,将该基因的编码序列进行了人为修饰:全部使用了植物偏好的密码子合成全长基因;并在其C端添加内质网滞留肽序列KDEL;将它和标记基因一起置于一个携带MAR序列的植物表达载体中,用于烟草的转化。ELISA检测结果表明:不含MAR序列的转基因烟草中hEGF的表达水平约为总蛋白的0.09%;而含MAR序列的转基因烟草hEGF最高表达水平达到了可溶性蛋白的0.29%。细胞延伸实验证明,重组蛋白使Vero E6细胞得到了最大限度的延伸,与商品化生长因子具有相同的活性。通过MTT实验证明重组蛋白促进了细胞增殖。这些资料表明经过设计的重组hEGF在植物中的积累水平能够大幅度的提高并保持其生物活性。 本研究首次从紫芝(Garnodum japoncium)中克隆出一个新的真菌免疫调节基因,将其命名为FIP-gja,序列递交到NCBI,接收号为:AY987805。大肠杆菌BL21中表达的FIP-GJA达到36.5mg/L培养液。经镍柱纯化的原核表达产物免疫家兔获得高效价多克隆抗体。同时,将FIP-gja与从灵芝(Garnodum lucidum)中克隆出的LZ-8编码基因构建到植物双元表达载体中转入烟草。ELISA检测表明两者在烟草中的表达量分别达到了总蛋白的0.18%和0.31%。功能实验研究结果表明,LZ-8与FIP-gja均能有效的提高TNF-α基因mRNA的转录水平,且提高幅度与剂量有关系。由此体现了植物中表达的真菌免疫调节蛋白具有与天然免疫调节蛋白相当的生物活性。