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牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)寄生于牛体内引起的以高热、贫血、出血、消瘦和体表淋巴结肿大为主要临床症状的一种血液原虫病。近年来,牛瑟氏泰勒虫病在我国的流行区域逐渐扩大,发病率和死亡率也呈上升趋势,已给养牛业带来严重的经济损失,是威胁畜牧业健康发展的重要疫病之一牛瑟氏泰勒虫P23、P33表面蛋白基因均具有较好的抗原性,在抗牛瑟氏泰勒虫感染中起到重要作用。为更好的利用P23和P33表面蛋白,本研究以pMD18-T-P23-P33为模板,设计特异性引物,PCR扩增牛瑟氏泰勒虫P23-33融合基因,克隆、酶切P23-33融合基因后,亚克隆至腺病毒穿梭载体pCR259。将构建的重组穿梭质粒pCR259-P23-33转化至含腺病毒骨架质粒Transpose-Ad294的E.coli HighQ-1TM感受态细胞中,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-P23-33。PCR、酶切鉴定正确后转染HEK-293细胞,包装重组腺病毒,RT-PCR和IPMA(免疫过氧化物酶单层细胞试验)检测基因表达情况。测定病毒滴度后,免疫BALB/c小鼠,检测血清中抗体水平和细胞因子IL-4、IFN-y水平,评价重组腺病毒的免疫效果。结果显示,成功构建含1135bp融合基因的重组腺病毒质粒pAd-P23-33,经RT-PCR和IPMA检测融合基因在BHK293细胞中获得表达,测定重组腺病毒滴度为6.3×107IU/ml。重组腺病毒pAd-P23-33免疫BALB/c小鼠后,血清中的抗体水平和细胞因子IL-4、IFN-y水平均显著高于重组质粒pVAX-P23-P33免疫组和PBS对照组(P<0.01)。本试验为牛瑟氏泰勒虫病重组腺病毒疫苗的深入研究奠定了基础。