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玉米弯孢菌叶斑病是近几年发生在我国主要玉米产区的一种新病害,由于其危害重,传播蔓延速度快,至今全国已有十多个省市有该病害报道,在有些地区已构成严重威胁,成为玉米生产上的主要病害,其严重程度有超过玉米大、小斑病的趋势。鉴于该病害对玉米生产的重要影响,本文首次从全国11个省范围内进行采样分离,从形态和分子水平对获得的148株弯孢菌(Curvularia spp.),进行了鉴定和分类。从致病性、DNA遗传多态性和营养体亲和性等方面对引起玉米弯孢菌叶斑病的病原群体结构展开了研究。还对四川省常用玉米资源进行了田间人工接种病原菌的抗性鉴定。以上方面的研究结果表明: 通过形态鉴定,来自玉米弯孢菌叶斑病病害标样中的148株弯孢菌被鉴定为9个种和1个变种,即新月弯孢菌(C.lunata)、苍白弯孢(C.pallescens)、新月弯孢菌气生变种(C.lunata var.aeria)、棒弯孢(C.clavata)、C.ovoidea、不等弯孢(C.inaequalis)、塞河弯孢(C.senegalensis)、香茅弯孢(C.cymbopogonis)、Curvularia sp1和Curvularia sp2。它们从标样中的分离频率分别为63.2%、31.6%、18.4%、10.5%、10.5%、3.9%、1.3%、2.6%、1.3%和1.3%;占总分离菌株数的百分比分别为42.6%、24.3%、10.0%、10.8%、6.8%、2.0%、0.7%、1.4%、0.7%和0.7%。新月弯孢菌、苍白弯孢、新月弯孢菌气生变种、棒弯孢和C.ovoidea是病害标样中的主要类群,其中新月弯孢为优势种。不等弯孢、塞河弯孢、香茅弯孢、Curvularia sp1和Curvulariasp2只在少数标样中能分离到。 对83个弯孢菌菌株(76个分离自玉米弯孢菌叶斑病和7个来自其它寄主)的致病性测定结果表明,供试的10个形态种和1个变种中,新月弯孢菌、苍白弯孢、新月弯孢菌气生变种、棒弯孢和C.ovoidea等能引起典型的症状,是玉米弯孢菌叶斑病的病原菌,其中新月弯孢菌是优势种。这些病原菌的致病性分化为强、中、弱和不致病4种类型,具中等以上致病性的菌株占优势。涉及不等弯孢、香茅弯孢、塞河弯孢、画眉弯孢(C.eragrostidis)、Curvularia sp1和Curvularia sp2等的菌株不能引起明显的症状,不是引起玉米弯孢菌叶斑病的病原菌。 对包括新月弯孢菌及其近似种的80个菌株(2株来自其它寄主)进行RAPD分析表明,菌株间具有丰富的遗传多样性,在相似系数约0.61处,所有菌株被聚为4个组,但86.3%的菌株聚入优势组RAPD Ⅰ内,其余菌株被聚入另外3个组内。在RAPD Ⅰ内共69个菌株。包含有大多数C.lunata菌株和所有C.lunata var.aeria,C.pallescens,C.clavata利C.ovoidea的参试菌株,显示这些种间相似性较高。但在一定的相似水平上,这些菌株(除1个菌株外)可明显分为2个亚组,大多数C.lunata与C.lunata var.aeria聚为1个亚组;C.pallescens,C.clavata和C.ovoidea聚为另一亚组。表明RAPD分析能反映新月弯孢菌(含变种)与其它近似种间的差异。通过对40株弯孢菌的ITS/5.8S序列分析表明,同RAPD分析结果一样,大多数C.lunata菌株与C.pallescens、C.ovoidea和C.clavata)相似性高,在此区域具有完全相同的DNA序列,表明它们之间在遗传上存在一定的关系。另外,ITS/5.8S序列系统发育分析对其它形态鉴定种具有很好的辅助鉴定作用,支持形态鉴定的c.inQequalis、C。朔bopogonis、c senegeg口lensis和c脚ularia sPI为独立种和定名,并进一步将curvularia spZ鉴定为中隔弯抱(Curvularia intermedia)。 通过RAPO和rrs/5 .85区域序列分析表明,新月弯抱菌群体内菌株间存在丰富的遗传多样性。根据RAPO数据,在相似系数约0.62处分为3组。第一组为优势组,多数菌株间相似性高,在ITS区域具有完全相同的DNA序列,包含来自各发病区的大多数致病菌株,是引起玉米弯抱菌叶斑病的优势类群。第二、第三组与第一组在RAPO带型和ITS15.ss区域序列上差异人,且致病性极弱或不致病。上述结果表明,C lunata种内菌株的遗传多样性与致病性相关,但与菌株地理来源无明显的直接关系。 对新月弯抱菌(Clunata)营养体亲和群鉴定方法的研究表明,硝酸盐缺陷型(nl’l)突变体互补测试法最适宜用于分析其营养体亲和群。菌株在KCIO3浓度1 .5%3.0%的KPS中诱导表明,2.0%3.0%KaO3适宜于大多数菌株。抗氯酸盐突变体在Czapek培养基中能鉴定出nit突变体,但在MM上却不能。全部3504抗氯酸盐突变体在Czapek中共鉴定出328个稳定的nit突变体,其中nitl占58.8%,nit3占26.8%,NitM占13.8%,nirD(三种氮源都不能利用)占0.6%。37个菌株中,21个(73%)获得了nit突变体,16个(26%)还没有,仅5个菌株获得了NitM突变体。各菌株突变体类型间只有NitM与nl’tl或nit3是异核亲和的,其余均不能产生亲和反应。用5个菌株的NitM突变体作测试菌株将19个C lunata菌株(属RAPDI,大多数为致病菌株)划分为4个VCG,初步表明Clun口ta群体内存在丰富的vc多样性,营养体亲和性与菌株地理来源没有明显的关系. 本试验用田间自然条件下人l二接种的方法,对四川省主栽玉米品种(组合)和白交系共119份玉米材料进行了抗玉米弯抱菌叶斑病的鉴定,结果表明没有对新月弯抱菌?