论文部分内容阅读
目的:LyGDI（鸟苷酸解离抑制因子-2）,又称RhoGDI2、D4-GDI或RhoGDIβ,是RhoGDP酶解离抑制因子RhoGDI家族的主要成员之一,在细胞凋亡、转移及侵袭的很多方面起到调节作用,包括细胞极化,细胞骨架组织及由外环境而来的细胞信号转导。本实验采用不同剂量的60Coγ射线照射K562、HL-60细胞,探究60Coγ射线对K562、HL-60细胞凋亡及周期的影响;及LyGDI和断裂的LyGDI在细胞凋亡中的作用和其对Rac1蛋白的调控机制。方法:（1）采用不同剂量的60Coγ射线照射K562、HL-60细胞,藻红B﹙Erythrosine B﹚染色观察细胞凋亡率。（2）采用不同剂量的60Coγ射线照射K562、HL-60细胞,PI染色流式细胞仪检测细胞周期分布。（3）采用Western Blot方法检测LyGDI对Rac1蛋白表达的影响。（4）采用激光共聚焦显微镜观察60Coγ射线照射后Rac1蛋白在细胞内分布的变化。结果:（1）藻红B染色结果表明,不同剂量的60Coγ射线照射K562和HL-60细胞后,随着剂量的增大和时间延长细胞凋亡率相应增加,在8Gy照射72小时K562细胞的凋亡率仅12.7%,而HL-60细胞凋亡率达到了94%,K562细胞的凋亡率明显低于HL-60细胞的凋亡率（p〈0.05）。（2）不同剂量的60Coγ射线照射K562和HL-60细胞后,G2期细胞所占的比例增加,G1期细胞所占的比例减少, K562细胞G2期所占比例低于HL-60细胞G2期所占的比例（p〈0.05）,而HL-60细胞G2期解除的速率大于K562细胞（p〈0.05）。（3）Western Blot结果证实,K562细胞中未检测到LyGDI断裂,而在HL-60细胞中检测到了LyGDI的断裂条带。照射前后LyGDI和Rac1蛋白表达量无显著性变化。（4）激光共聚焦显微镜观察60Coγ射线照射后Rac1蛋白在细胞内的分布发生变化,主要分布在细胞膜,少量的分布在细胞核。结论:（1）60Coγ射线辐射下K562、HL-60细胞主要阻滞在G2期,HL-60细胞的辐射敏感性高于K562细胞;（2） LyGDI的断裂促进了HL-60细胞凋亡;（3）照射前后LyGDI对总的Rac1蛋白的表达无显著性影响;（4）激活的Rac1主要在细胞膜上参与细胞凋亡信号的转导;