产高粘度微生物多糖的菌种筛选及其单糖组分分析

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微生物胞外多糖具有独特的流变学特性,在食品、饲料、医药和化妆品等领域的应用备受青睐。目前生产和应用最多的胞外多糖主要有黄原胶、结冷胶、热凝胶、普鲁兰胶和右旋葡聚糖等,各种多糖结构不同,功能各异。本文旨在从自然环境中筛选和分离出一株分泌高粘度胞外多糖且具有工业应用潜力的菌株,通过单因素实验法优化发酵培养基的组成和发酵培养条件;并探索了该胞外多糖的提取分离和纯化工艺,对多糖的流变学特性和单糖组分进行了初步分析。具体研究内容和结果如下:(1)首先从江苏省无锡市一处农田蔬菜地和几处公园共采集了六个不同地点的多个土样和水样,以葡萄糖为底物的YM琼脂培养基作为筛选培养基,利用菌落形态学、细胞形态学和菌落拉丝法进行初步筛选,然后以发酵液粘度和多糖产量为分析指标进行复筛,获得分泌高粘度胞外多糖的菌株。(2)对筛选得到的菌株进行透射电镜观察,其细胞呈圆直杆状,细胞平均大小为(0.9~1.0) μm×(1.4~1.8) μm,且菌体细胞周围被一层胞外多糖所包围。利用16S rDNA序列分析法对筛选菌株进行鉴定,确定该菌株为一株赫氏埃希菌(Escherichia hermannii),并命名为Escherichia hermannii XPF-1,其16S rDNA核苷酸序列已提交到GenBank,获得注册序列编号为JQ306504。该产多糖菌株已保藏于江南大学中国高校工业微生物资源与信息中心,菌种编号为CICIM B5761。目前有关该种细菌的相关报道较少,其产多糖的现象也较罕见。(3)对Escherichia hermannii XPF-1发酵产胞外多糖的发酵培养基组分及发酵培养条件进行单因素优化实验,结果表明,最佳发酵培养组成为:麦芽糖30g/L,复合氮源5g/L(其中NaNO380%,酵母粉20%),K2HPO42g/L,MgSO4·7H2O0.1g/L,初始pH6.0,发酵温度为30℃,接种量5%(v/v),装液量100mL/500mL。该优化条件下Escherichiahermannii XPF-1的多糖产量为11.5g/L,发酵液粘度为1160mPa·s,较初始发酵条件下多糖产量3.8g/L,发酵液粘度141mPa·s,两者分别增加为原来的3倍和8倍。(4)对筛选菌株所产胞外多糖进行分离提取及其单糖组分的初步研究。通过分析知菌株的发酵液中含有胞外多糖、细菌菌体和其他物质。首先采用离心法去除菌体,乙醇提取、洗涤得多糖沉淀,采用Sevag法去除蛋白质,透析去除盐分。最后对多糖进行完全酸水解,利用离子色谱法测定多糖水解物中的单糖组分,确定X1主要由鼠李糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖和半乳糖组成,各组分的摩尔比为2.8:11.4:1.0:36.4:3.0:0.5:14.6。
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