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目的:炎症性肠病(inflammation bowel disease,IBD)被誉为“绿色癌症”,主要特征为慢性炎症以及组织损伤,其中约20%的患者可进展成结肠癌。近年来我国IBD发病率持续增加,但是临床上缺乏疗效确切、毒性低的治疗药物。白头翁是一种常用的中药,临床上常用于治疗IBD,但其治疗IBD的物质基础和作用机制尚不清楚。本课题研究了白头翁中的指标性成分—白头翁皂苷B4(anemoside B4)治疗炎症性肠病的药效学和初步的作用机制,有望为IBD的治疗提供具有潜力的候选药物分子。方法:分别采用乙酸、2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid(TNBS)、dextran sulphate sodium(DSS)三种化学诱导剂构建IBD动物模型,通过检测体重变化、Disease activity index(DAI)、肠重系数、组织病理以及炎症因子释放等指标探讨白头翁皂苷B4治疗实验动物IBD的作用:采用lable-free定量蛋白组学技术分析因白头翁皂苷B4而表达改变的蛋白;使用qPCR检测白头翁皂苷B4对钙结合蛋白家族Calgranulin B(S100A9)以及趋化因子的mRNA表达的影响;用免疫印迹方法研究白头翁皂苷B4对S100A9 下游通路的影响;用免疫荧光探讨白头翁皂苷B4对结肠粘膜细胞增殖、凋亡以及中性粒细胞聚集的影响。结果:在TNBS模型中,白头翁皂苷B4能够恢复大鼠体重、降低DAI评分以及肠重系数,抑制炎性因子 Interleukin-1β(IL-1β)、Interleukin-6(IL-16)、Tumor necrosis factor-α(TNF-α)的分泌,抑制趋化因子 CXCL-1、CXCL-2 的表达,改善结肠组织病理状况,抑制结肠上皮细胞凋亡,促进结肠上皮细胞增生,抑制中性粒细胞在结肠部的募集,抑制MPO的活性。在乙酸模型中和DSS诱导的急性结肠炎模型中,白头翁皂苷B4具有相似的IBD治疗作用,其药效与阳性对照药美沙拉嗪相当。因此我们进一步探讨其作用机制。非标记定量蛋白质组学分析了六个结肠样品,发现56种蛋白质被白头翁皂苷B4显著改变(与TCA循环和呼吸电子传递链等通路密切相关),S100A9是下调最明显的蛋白,并与结肠炎发病机理中的NF-κB和MAPK信号通路相关。在结肠组织内白头翁皂苷B4明显降低结肠组织S100A9蛋白和mRNA的表达量,抑制其下游信号TLR4/NF-κB 通路,包括(p-NF-κB p65、p-JNK、IL-6、NOD2)。在 CaCo-2 细胞中我们发现白头翁皂苷B4可明显降低S100A9 mRNA和蛋白的表达。进一步的实验证明,在CaCo-2细胞中白头翁皂苷B4可以显著性抑制Lipopolysaccharide(LPS)和S100A9诱导的MAPK/NF-κB通路的激活。结论:以上实验结果表明白头翁皂苷B4可能是通过抑制S100A9/NF-κB通路来治疗IBD,可为白头翁皂苷B4治疗IBD提供实验依据。