目的 探讨肿瘤细胞培养上清液是否能诱导正常细胞癌变及可能 机理。以便寻找用于肿瘤诊断、治疗及判断预后的特异性标志物,为抗肿瘤新药的开发提供良好的细胞模型和理论依据。 方法 采用小鼠肝癌细胞 H22 的培养上清液诱导小鼠成纤维细胞L929 的方法,诱导细胞为 L929-H22。联合流式细胞仪、免疫细胞化学法、免疫组织化学法、改良的细胞 ELISA 法及裸鼠体内的成瘤试验等来观察诱导细胞是否发生癌变,并探讨其癌变的可能机理。 结果 诱导细胞 L929-H22 较正常细胞 L929 细胞周期分布有明显差异,G0/G1期细胞比例明显减少,S 期细胞比例明显增大,G2/M 期细胞比例变化不大;增殖指数 PI 明显增高。L929-H22细胞 MTP53、C-Myc、CD1、NF-κB、iNOS、VEGF、KDR、IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR、EGFR、Survivin、CathepsinD 的表达显著增强,而 P27、Bax、Fas、Caspase-3 、E-cad 、nm-23 的表达较 L929 细胞显著减弱。H22 细胞表达生长因子 VEGF、IGF-Ⅱ。L929-H22 细胞接种于裸鼠体内,具有致瘤性,54 天瘤重 14.5 克,瘤体积约为 4cm×3cm×4.5cm,病理切片形态学诊断为纤维肉瘤,组织学鉴定波形蛋白(vimentin)呈阳性表达, S-100、结蛋白(Desmin)、角蛋白(CK)呈阴性表达,证明肿瘤组织来源于成纤维细胞。 结论 (1)肿瘤细胞培养上清液诱导细胞 L929-H22 较正常细胞 L929增殖增加;(2)L929-H22凋亡减弱;(3)L929-H22具有侵袭转移能力;(4)L929-H22 细胞发生恶性转化,具有体内成瘤性;(5)正常细胞发生癌变的可能机理:肿瘤细胞分泌如 VEGF、IGF-Ⅱ等多种生长因子,以旁分泌的作用方式与正常细胞胞膜上的相应受体结合,通过多种信号转导通路,使正常细胞具有增殖增加、分化障碍、凋亡减弱、侵袭转移等肿瘤细胞的多种特性,并发生癌变。